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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问pET30b这个载体在IPTG诱导后有没有可能表达除了目的蛋白以外的其他蛋白？
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shenxing325

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by once1015 at 2012-10-22 15:50:16
一抗是HIS 有可能被折叠后的蛋白包裹起来 所以比较难检查，个人觉得做个CONTROL 不就行了吗？ 实在不行 去割胶打 MS

那个请问一下，CONTROL是什么？没听说过。我是打算实在不行就去做个MODI-TOF
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11楼2012-10-23 08:55:39
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once1015

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-23 08:55:39
那个请问一下，CONTROL是什么？没听说过。我是打算实在不行就去做个MODI-TOF...

就是空白对照啊 说习惯了， 如果方便的话 MS 还是最靠谱的
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12楼2012-10-23 12:26:28
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shenxing325

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by once1015 at 2012-10-23 12:26:28
就是空白对照啊 说习惯了， 如果方便的话 MS 还是最靠谱的...

晕。。。对照不是contrast吗。。？谢谢啦，我会试一下的
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13楼2012-10-23 15:02:13
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shenxing325

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by once1015 at 2012-10-23 12:26:28
就是空白对照啊 说习惯了， 如果方便的话 MS 还是最靠谱的...

不好意思，是contral。。。理解错误
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14楼2012-10-24 09:54:26
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shenxing325

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-22 12:48:20
不知道你表达蛋白是疏水部分的目的是什么。首先，如果只表达一部分的话需要确定表达的这部分形成独立结构，因为去掉蛋白的一部分氨基酸可能造成folding错误，降低蛋白的稳定性。你说的疏水部分跨膜吗？顺便问一下， ...

做了破碎后发现这个小蛋白完全在可溶蛋白里面，这样的话Western不是应该更好做吗？
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15楼2012-10-24 11:02:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
15楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-24 11:02:15
做了破碎后发现这个小蛋白完全在可溶蛋白里面，这样的话Western不是应该更好做吗？...

可溶蛋白操作起来更加容易是事实，不过你确定截掉一部分后的蛋白和你的目的蛋白的结构和功能是同样的吗？如果只是为了做抗体的话，直接表达亲水部分更靠谱。因为亲水部分一般暴露在分子表面，抗原性比较强。
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16楼2012-10-25 06:24:40
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547star

木虫 (著名写手)
很到过论文报道，T7表达系统加IPTG后有十多种蛋白上调1-3倍，也有十多种下调。如果是表达量明显高很多的，建议检查读码框是否正确。
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为什么
17楼2013-06-28 23:50:44
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