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yghboy168

银虫 (小有名气)

[求助] 原生质体制备 溶菌酶配制 P缓冲溶液 已有2人参与

我现在打算做原生质体制备和融合,不知道固体的溶菌酶用什么缓冲溶液比较好,最适的PH?,还有文献里提到P缓冲溶液,不知道组分是什么?希望帮忙!多谢!
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眼内有尘三界窄,心头无事一床宽!
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电电的开始

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by ccdbaobao at 2014-09-09 10:56:28
您好,我也在做枯草的原生质体制备,使用SMM作为高渗缓冲液的,但是再生时菌落数小于酶解后菌落数,重复多次都是如此,不知问题出在哪里。希望大神可以给与指导指导,跪谢啦啦啦。要是能看看你的整个实验流程和方案 ...

再生时是不是使用高渗培养基呢?再生前有用SMM洗涤残留的溶菌酶,再用SMM制备悬浮液?还有一个是制备原生质体的菌是不是处于对数期的?
为自己而开始
9楼2014-09-10 09:32:07
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lgs1

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-21 17:42:58
你可以看看这篇文献Bacterial  Protoplast  Fusion:  Recombination  in Fused  Protoplasts of Streptomyces coelicolor,里面有P溶液的配方,链接是http://good.gd/2264083.htm
2楼2012-10-21 15:22:18
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电电的开始

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+3, 鼓励新虫发帖 2012-10-21 17:43:16
(一)缓冲液
(1)0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH6.0),100ml
磷酸二氢钾1.5g       磷酸氢二钾3.5g
(2)高渗缓冲液(10ml);于上述缓冲液中加入0.8 mol/L甘露醇
(3)0.9%生理盐水100ml
7x4.5ml+5x4.5ml,其余装入三角瓶灭菌
(二)原生质体稳定液(SMM)100ml
0.5 mol/L蔗糖、20 mol/L MgCl2、0.02 mol/L顺丁烯二酸,调pH6.5
5x4.5ml,其余装入三角瓶灭菌
(三)溶菌酶液
用SMM溶液配制,终浓度为1mg/ml,过滤除菌备用。
我用的菌株是:枯草芽孢杆菌株
为自己而开始
3楼2012-10-21 16:11:41
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yc652090251

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-22 16:16:56
p缓冲液/L
(1)蔗糖  103g
        硫酸钾 0.25g
        氯化镁 2.02g
       微量元素 2ml 单独灭菌()
      蒸馏水800ml
(2)磷酸二氢钾(0.5%) 1ml
        cacl2 (3.68%)    10ml
        TES  (5.73%,PH7.2)    10ml
每80(1)加入(2中)各1ml   10ml  10ml
低调做人好么~~
4楼2012-10-22 09:42:25
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