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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » LB扩大培养老长出颗粒状，急急急~~~！
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fanny9900108

金虫 (小有名气)

[求助] LB扩大培养老长出颗粒状，急急急~~~！

本人做PCR突变，跑胶正常条带也对，转化到XL10之后，在LB固体培养基上能长出单菌落，但是将单菌落挑入到含AMP的LB培养基中长出来的有颗粒状，LB澄清，有时候有颗粒状，也会混，求高手指点付图如下：

2012-10-16 09.12.33.jpg



2012-10-16 09.13.30.jpg



2012-10-16 09.13.56.jpg
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stayhungry,stayfoolish
1楼 2012-10-18 09:08:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
挑单菌落先在试管中小量培养过夜，然后再按照1:-50-100扩大培养。
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2楼2012-10-18 09:26:25
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fanny9900108

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-18 09:26:25
挑单菌落先在试管中小量培养过夜，然后再按照1:-50-100扩大培养。

我用小管试过了，长出来一粒一粒的少了，但是有絮状沉淀，LB也没有特别混~~
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stayhungry,stayfoolish
3楼2012-10-18 10:59:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by fanny9900108 at 2012-10-18 10:59:04
我用小管试过了，长出来一粒一粒的少了，但是有絮状沉淀，LB也没有特别混~~...

感觉是你的氨苄有问题。你氨苄的浓度多少？到平板的时候有没有等培养基冷却到50°C一下？建议重新配置抗生素STOCK，做平板，挑单菌落划线后再接液体。
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4楼2012-10-18 11:54:09
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fanny9900108

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-18 11:54:09
感觉是你的氨苄有问题。你氨苄的浓度多少？到平板的时候有没有等培养基冷却到50°C一下？建议重新配置抗生素STOCK，做平板，挑单菌落划线后再接液体。...

氨苄的浓度时100ng/ML,新配的，别人也用了我到的板子，能长得正常，如果不冷却到50度，会怎么样？我这可不可能是杂菌啊？能不能从图片上看出有什么问题么
？
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stayhungry,stayfoolish
5楼2012-10-18 12:37:01
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能噬菌体污染，建议排除后继续。过去污染过，菌液OD先增加，然后下降变透明，隐约有颗粒。跟楼主情况相似。
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金币是赌出来的
6楼2012-10-18 14:06:40
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fanny9900108

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wjswj at 2012-10-18 14:06:40
有可能噬菌体污染，建议排除后继续。过去污染过，菌液OD先增加，然后下降变透明，隐约有颗粒。跟楼主情况相似。

噬菌体污染可能的原因有哪些?
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stayhungry,stayfoolish
7楼2012-10-18 16:22:40
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fanny9900108

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wjswj at 2012-10-18 14:06:40
有可能噬菌体污染，建议排除后继续。过去污染过，菌液OD先增加，然后下降变透明，隐约有颗粒。跟楼主情况相似。

有什么方法可以解决？
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stayhungry,stayfoolish
8楼2012-10-18 16:23:32
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fanny9900108

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wjswj at 2012-10-18 14:06:40
有可能噬菌体污染，建议排除后继续。过去污染过，菌液OD先增加，然后下降变透明，隐约有颗粒。跟楼主情况相似。

噬菌体污染是在接种的时候产生的还是我长在固体培养基的板子上就已经污染了？
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stayhungry,stayfoolish
9楼2012-10-18 16:26:10
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huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by fanny9900108 at 2012-10-18 12:37:01
氨苄的浓度时100ng/ML,新配的，别人也用了我到的板子，能长得正常，如果不冷却到50度，会怎么样？我这可不可能是杂菌啊？能不能从图片上看出有什么问题么
？...

氨苄应该是100ug/ml吧
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10楼2012-10-18 16:46:11
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