24小时热门版块排行榜    

查看: 3257  |  回复: 20

royxueli

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by novodavid at 2012-10-18 09:01:48
求问你们的湿转条件?我需要转15KD的蛋白,以前是半干,反而不是很好。你们的电流,电压,时间,滤纸层数是多少呢?...

电压是100v。。如果不能恒压就恒流300mA,反正是那个biorad电源的上限了。。上下各两层滤纸,时间是1个小时
11楼2012-10-19 00:26:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-18 11:33:17
你用的是PVDF膜吗?不会转过的,NC膜的话不好说。...

是PVDF膜。这次转膜预染Marker转上了,但是用立春红染色还是木有蛋白条带,可能是染色有问题吧。。。今天能看到结果怎样。。。
12楼2012-10-19 11:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


shenxing325: 金币+1, 有帮助 2012-10-19 19:59:54
引用回帖:
12楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-19 11:52:44
是PVDF膜。这次转膜预染Marker转上了,但是用立春红染色还是木有蛋白条带,可能是染色有问题吧。。。今天能看到结果怎样。。。...

如果marker转上了,你的目的蛋白应该没问题。你可以看看marker是不是转完全了。丽春红染不好可能和蛋白的量有关,看不到也不一定没有。再说,一般的Western的灵敏度比染色要高。祝实验成功。
13楼2012-10-19 12:26:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
300mA转1.5小时足够转充分,你也可以适当缩短转膜时间,转完之后把胶染一下看看效果
14楼2012-10-19 12:56:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-19 12:26:27
如果marker转上了,你的目的蛋白应该没问题。你可以看看marker是不是转完全了。丽春红染不好可能和蛋白的量有关,看不到也不一定没有。再说,一般的Western的灵敏度比染色要高。祝实验成功。...

木有成功。。。marker基本都转上了,蛋白应该也转上了,胶都是透明的了。但是立春红染色没有颜色,最后DAB试剂盒染色也没有条带。会不会是标签掉了啊。。。
15楼2012-10-19 19:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
15楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-19 19:59:41
木有成功。。。marker基本都转上了,蛋白应该也转上了,胶都是透明的了。但是立春红染色没有颜色,最后DAB试剂盒染色也没有条带。会不会是标签掉了啊。。。...

你确定抗体没有问题吗?如果膜转好了的话应该没问题啊。不知道你说是什么标签?你用的标签抗体检测吗?
16楼2012-10-20 06:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 06:36:33
你确定抗体没有问题吗?如果膜转好了的话应该没问题啊。不知道你说是什么标签?你用的标签抗体检测吗?...

抗体应该没有问题,同一个表达载体,前两天做的一个40多kD的重组蛋白就做出来了,就是普通的His标签啊
17楼2012-10-20 10:54:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
17楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-20 10:54:18
抗体应该没有问题,同一个表达载体,前两天做的一个40多kD的重组蛋白就做出来了,就是普通的His标签啊...

有可能是上样量不同。你的样品也是用菌表达的重组蛋白吗,还是其他宿主的His-tagged蛋白?标签不大可能掉的吧,你做的His-tag是可以用酶切掉的吗?
18楼2012-10-20 11:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 11:44:37
有可能是上样量不同。你的样品也是用菌表达的重组蛋白吗,还是其他宿主的His-tagged蛋白?标签不大可能掉的吧,你做的His-tag是可以用酶切掉的吗?...

嗯,这个也是自己表达的重组蛋白。想想也是,His标签也不大容易掉。。。那就说明,这个不是我要的蛋白?那就悲剧了
19楼2012-10-21 18:00:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
19楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-21 18:00:18
嗯,这个也是自己表达的重组蛋白。想想也是,His标签也不大容易掉。。。那就说明,这个不是我要的蛋白?那就悲剧了...

你可以试试用镍柱纯化一下看看。如果能挂柱纯化到的话,起码说明his-tag在上面了,经纯化过的蛋白可以有多种方法进一步鉴定。
20楼2012-10-21 23:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shenxing325 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302求调剂 +3 小贾同学123 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:39 by zhq0425
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +3 张vvvv 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:25 by 张vvvv
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 材料与化工求调剂 +3 为学666 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:09 by 加号+
[考研] 304求调剂 +6 小熊joy 2026-03-14 6/300 2026-03-16 12:59 by Iveryant
[硕博家园] 深圳大学硕士招生(2026秋,传感器方向,仅录取第一志愿) +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] [0860]321分求调剂,ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂,科研和技能十分丰富,求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
信息提示
请填处理意见