5楼: Originally posted by novodavid at 2012-10-18 09:01:48
求问你们的湿转条件？我需要转15KD的蛋白，以前是半干，反而不是很好。你们的电流，电压，时间，滤纸层数是多少呢？...

10楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-18 11:33:17
你用的是PVDF膜吗？不会转过的，NC膜的话不好说。...

12楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-19 11:52:44
是PVDF膜。这次转膜预染Marker转上了，但是用立春红染色还是木有蛋白条带，可能是染色有问题吧。。。今天能看到结果怎样。。。...

13楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-19 12:26:27
如果marker转上了，你的目的蛋白应该没问题。你可以看看marker是不是转完全了。丽春红染不好可能和蛋白的量有关，看不到也不一定没有。再说，一般的Western的灵敏度比染色要高。祝实验成功。...

15楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-19 19:59:41
木有成功。。。marker基本都转上了，蛋白应该也转上了，胶都是透明的了。但是立春红染色没有颜色，最后DAB试剂盒染色也没有条带。会不会是标签掉了啊。。。...

16楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 06:36:33
你确定抗体没有问题吗？如果膜转好了的话应该没问题啊。不知道你说是什么标签？你用的标签抗体检测吗？...

17楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-20 10:54:18
抗体应该没有问题，同一个表达载体，前两天做的一个40多kD的重组蛋白就做出来了，就是普通的His标签啊...

18楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 11:44:37
有可能是上样量不同。你的样品也是用菌表达的重组蛋白吗，还是其他宿主的His-tagged蛋白？标签不大可能掉的吧，你做的His-tag是可以用酶切掉的吗？...

19楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-21 18:00:18
嗯，这个也是自己表达的重组蛋白。想想也是，His标签也不大容易掉。。。那就说明，这个不是我要的蛋白？那就悲剧了...