24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3296  |  回复: 20

royxueli

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by novodavid at 2012-10-18 09:01:48
求问你们的湿转条件?我需要转15KD的蛋白,以前是半干,反而不是很好。你们的电流,电压,时间,滤纸层数是多少呢?...

电压是100v。。如果不能恒压就恒流300mA,反正是那个biorad电源的上限了。。上下各两层滤纸,时间是1个小时
11楼2012-10-19 00:26:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-18 11:33:17
你用的是PVDF膜吗?不会转过的,NC膜的话不好说。...

是PVDF膜。这次转膜预染Marker转上了,但是用立春红染色还是木有蛋白条带,可能是染色有问题吧。。。今天能看到结果怎样。。。
12楼2012-10-19 11:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


shenxing325: 金币+1, 有帮助 2012-10-19 19:59:54
引用回帖:
12楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-19 11:52:44
是PVDF膜。这次转膜预染Marker转上了,但是用立春红染色还是木有蛋白条带,可能是染色有问题吧。。。今天能看到结果怎样。。。...

如果marker转上了,你的目的蛋白应该没问题。你可以看看marker是不是转完全了。丽春红染不好可能和蛋白的量有关,看不到也不一定没有。再说,一般的Western的灵敏度比染色要高。祝实验成功。
13楼2012-10-19 12:26:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
300mA转1.5小时足够转充分,你也可以适当缩短转膜时间,转完之后把胶染一下看看效果
14楼2012-10-19 12:56:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-19 12:26:27
如果marker转上了,你的目的蛋白应该没问题。你可以看看marker是不是转完全了。丽春红染不好可能和蛋白的量有关,看不到也不一定没有。再说,一般的Western的灵敏度比染色要高。祝实验成功。...

木有成功。。。marker基本都转上了,蛋白应该也转上了,胶都是透明的了。但是立春红染色没有颜色,最后DAB试剂盒染色也没有条带。会不会是标签掉了啊。。。
15楼2012-10-19 19:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
15楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-19 19:59:41
木有成功。。。marker基本都转上了,蛋白应该也转上了,胶都是透明的了。但是立春红染色没有颜色,最后DAB试剂盒染色也没有条带。会不会是标签掉了啊。。。...

你确定抗体没有问题吗?如果膜转好了的话应该没问题啊。不知道你说是什么标签?你用的标签抗体检测吗?
16楼2012-10-20 06:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 06:36:33
你确定抗体没有问题吗?如果膜转好了的话应该没问题啊。不知道你说是什么标签?你用的标签抗体检测吗?...

抗体应该没有问题,同一个表达载体,前两天做的一个40多kD的重组蛋白就做出来了,就是普通的His标签啊
17楼2012-10-20 10:54:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
17楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-20 10:54:18
抗体应该没有问题,同一个表达载体,前两天做的一个40多kD的重组蛋白就做出来了,就是普通的His标签啊...

有可能是上样量不同。你的样品也是用菌表达的重组蛋白吗,还是其他宿主的His-tagged蛋白?标签不大可能掉的吧,你做的His-tag是可以用酶切掉的吗?
18楼2012-10-20 11:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 11:44:37
有可能是上样量不同。你的样品也是用菌表达的重组蛋白吗,还是其他宿主的His-tagged蛋白?标签不大可能掉的吧,你做的His-tag是可以用酶切掉的吗?...

嗯,这个也是自己表达的重组蛋白。想想也是,His标签也不大容易掉。。。那就说明,这个不是我要的蛋白?那就悲剧了
19楼2012-10-21 18:00:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
19楼: Originally posted by shenxing325 at 2012-10-21 18:00:18
嗯,这个也是自己表达的重组蛋白。想想也是,His标签也不大容易掉。。。那就说明,这个不是我要的蛋白?那就悲剧了...

你可以试试用镍柱纯化一下看看。如果能挂柱纯化到的话,起码说明his-tag在上面了,经纯化过的蛋白可以有多种方法进一步鉴定。
20楼2012-10-21 23:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shenxing325 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703调剂,一志愿天津大学319分 +9 haaaabcd 2026-04-05 9/450 2026-04-06 08:19 by shangxh
[考研] 304求调剂 +7 c297914 2026-04-05 8/400 2026-04-05 22:13 by hemengdong
[考研] 315求调剂 +5 &123456789 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:55 by nepu_uu
[考研] 308求调剂 +4 maverick^_^ 2026-04-03 4/200 2026-04-05 19:08 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +3 李广火 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:57 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿江南大学085501机械工程专硕326分,本科佳木斯大学 +5 顾若浮生 2026-04-03 9/450 2026-04-05 09:57 by 1753564080
[考研] 265求调剂 +20 梁梁校校 2026-04-01 21/1050 2026-04-04 00:38 by userper
[考研] 材料科学与工程考研 +10 拯救皮特托先生 2026-04-02 10/500 2026-04-03 23:57 by userper
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +15 秋二十二 2026-03-30 15/750 2026-04-03 10:19 by linyelide
[考研] 专硕 351 086100 也是考的材科基 本科也是材料 +8 202451007219 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:50 by 蓝云思雨
[考研] 0703化学 +7 goldtt 2026-04-02 9/450 2026-04-03 09:36 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +8 双马尾痞老板2 2026-04-02 9/450 2026-04-02 14:45 by 5896
[考研] 求调剂推荐 +3 南山南@ 2026-04-01 3/150 2026-04-02 12:09 by xiaoranmu
[考研] 302求调剂一志愿北航070300,本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 085602化学工程268分蹲调剂 +8 月照花林。 2026-04-01 8/400 2026-04-01 22:08 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +10 李芷新1 2026-03-31 10/500 2026-04-01 14:38 by chenqifeng666
[考研] 本2一志愿C9-333分,材料科学与工程,求调剂 +9 升升不降 2026-03-31 9/450 2026-03-31 18:01 by 无际的草原
[考研] 江苏苏北高校诚邀调剂同学 +3 zzll406 2026-03-31 3/150 2026-03-31 16:54 by 及时行乐fan
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 麦恩莉. 2026-03-30 4/200 2026-03-31 14:35 by 记事本2026
[考研] 085601一志愿西北工业大学初试346 +4 085601初试346 2026-03-30 4/200 2026-03-31 07:47 by jp9609
信息提示
请填处理意见