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转基因小鼠鉴定southern blot探针设计
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准备用了pTRE2载体插入了单端融合EGFP的目的基因，做注射时切下tet启动子到polyA的序列。现在需要设计southern blot的探针，没做过southern blot，网上看看原理是挺好懂的，但是不知道探针要多长（我现在考虑是200~500左右），设计在哪里。 我放到小鼠里的是人的基因，但是这个基因和小鼠的同源性非常高，基本一模一样。当然我也可以把探针设计到EGFP那里，但我总觉得能杂交到目的基因最好。我放进去的是cDNA序列，小鼠的内源基因有内含子，但是外显子基本是100~150bp左右的，这个长度会杂交出信号么？ 另外，我设计的探针应该跨过消化基因组DNA的限制性内切酶位点么？这一点我有些不大明白。 请教各位了。谢谢！ |
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