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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PAGE的配制
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开心就好4453

铜虫 (小有名气)

[求助] PAGE的配制

求18%的聚丙烯酰胺的配制？
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1楼 2012-10-15 10:13:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-10-16 13:51:14
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiong-y-x at 2012-10-16 10:48:29
请问一下 刚搜相关的就看到这个铁帖子 您应该懂的比较多哦 那个比如说我配20%的胶 20ml定容 那个APS和TEMED的量有什么要求吗 还有丙烯酰胺的量有什么根据吗...

各种成分的量按照比例增加，20ml的话是13.3ml 30%的母液，APS和TEMED也是按比例增加，100ul APS，10ul TEMED. 其实APS和TEMED的量可以适当变化，因为各个实验室的条件下胶凝的速度略有差别，一般胶大致在30-60分钟凝好。胶一般不必定容，算好各个成分后混合就行了。
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6楼2012-10-16 12:49:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
你要配置18%的胶跑电泳吗？要先弄清楚你想干什么，还有胶的配置不光要知道浓度，还要知道丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺的比例，这会影响胶的孔径大小。一般常用的比例是37.5:1. 如果你不需要加尿素什么的，你可以配成30%的母液（292g丙烯酰胺，8g甲叉丙烯酰胺，溶解加水定容至1L）。
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2楼2012-10-15 13:21:14
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开心就好4453

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-15 13:21:14
你要配置18%的胶跑电泳吗？要先弄清楚你想干什么，还有胶的配置不光要知道浓度，还要知道丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺的比例，这会影响胶的孔径大小。一般常用的比例是37.5:1. 如果你不需要加尿素什么的，你可以配成30%的 ...

我打算跑18个碱基的，就是想看这18个碱基跑出的带。你说的加尿素是变性与非变性PAGE，你们有什么区别呢？我应该用的是非变性的就可以了吧？
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3楼2012-10-15 17:07:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-16 13:51:01
引用回帖:
3楼: Originally posted by 开心就好4453 at 2012-10-15 17:07:55
我打算跑18个碱基的，就是想看这18个碱基跑出的带。你说的加尿素是变性与非变性PAGE，你们有什么区别呢？我应该用的是非变性的就可以了吧？...

跑DNA的PAGE也要先配30%母液，可以用29:1的比例，就是29g丙烯酰胺和1g的甲叉丙烯酰胺定容到100ml。加不加尿素要看你的需要。
如果你在TBE下跑电泳的话，可以用如下体系：
在10ml中：5×TBE 2ml, 30%acrylamide 6ml, H2O 1.95ml, APS 50ul, TEMED 5ul
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4楼2012-10-16 07:35:35
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