应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎样确定合适的Tm值？
52/1返回列表
查看: 4139  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wei_suzhen

新虫 (小有名气)

[求助] 怎样确定合适的Tm值？

下面是我的引物的一些数据，根据这些数据怎么设计合适的退火温度？如果利用温度梯度来寻找合适的退火温度，大约从哪个范围设计温度，梯度是多少？每个梯度需要设计几个重复样品?

引物设计.png
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wei_suzhen

» 猜你喜欢
1楼 2012-10-14 13:08:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wei_suzhen

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 水寒冰006 at 2012-10-15 10:39:00
不知道你用的是哪家的PCR仪，一般PCR仪有一个gradient的设置，可以采用touch down PCR，即在一个样品里面做退火温度的梯度，在合适的温度，扩增产物的数量会呈现出优势，从而大量扩增，比你去做梯度要容易很多。

谢谢
实验室的PCR比较古老，先按温度梯度做做看看
赞一下 回复此楼
12楼2012-10-15 15:14:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

古屋子

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做梯度最好每隔温度梯度做两个重复，另外还得做空白对照
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-14 16:34:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wei_suzhen

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ilyzp at 2012-10-14 17:09:02
其实软件上已经给出了Tm值了，但是如果要做PCR还要看你在哪个公司合成引物，像是三博和华大，一般的Tm值都会比软件设计的还要高，你就用Tm-5去做就行，如果是英俊合成，一般Tm都比较低，会比软件设计的低很多，但是 ...

是生工生物工程（上海）公司合成的。不过引物还没送回来，现在设计一些实验方案。确定一下最适的退火温度
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-14 19:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wei_suzhen

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 古屋子 at 2012-10-14 16:34:48
做梯度最好每隔温度梯度做两个重复，另外还得做空白对照

你好，想问下怎么做空白对照
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-14 19:34:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭