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请教基因敲除！SOS，help
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各位同学，请问利用化学法转化后你们的单交换菌落多久能长出来？是否还要在双抗板二次复筛？复筛后是否要做抗性松弛？为什么？松弛培养后是否会造成抗性丢失呢？在蔗糖板利用sacB反选时如何提高阳性率？蔗糖含量是否越高越好？是否需要蔗糖板两次复筛？ 我的铜绿假单胞菌单交换后好几天在抗生素平板上不长菌落，后来长出的经蔗糖板反选后还是能在抗生素平板上生长，PCR结果显示都是阴性菌落•••• |
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scelab
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-10-07 19:59:01
tomichelle1: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-08 10:07:52
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问题太多，，， 单交换用抗性筛选，一定是多抗。时间长无所谓，从单细胞长成菌落，时间会很长。 蔗糖板sacB反选，有时是不必要的，可以换策略。从抗性角度筛。抗性长的话，就不是目标菌株。多挑几百个试试。 蔗糖不要超过10%。越高菌越难生长，渗透压增加。。。 |
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tomichelle1
2楼2012-10-07 18:44:31
3楼2012-10-08 10:11:53