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自然_法则银虫 (初入文坛)
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[求助]
PCR出现假阴性的对策
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| 虫子最近在做PCR，目的条带出现了，而且效果也比较理想，退火温度已经很高了，但仍然还有假阴性存在，离目的条带很近丰度很低，此外无其他杂带。问下大师们有没有治理假阴性的良方，谢谢 |
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水牛默默
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
自然_法则: 金币+6, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2012-10-08 18:46:38
自然_法则: 金币+6, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2012-10-08 18:46:38
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最好附张图片！ 1.其他PCR组分不换，单独换新的ddH2O作为阴性模板试试。一般阴性的话都是怀疑阴性模板污染。如果换水后仍是由杂带，再考虑换套新的PVR组分，考虑是否是PCR的酶，dNTPs，Buffer污染等。 2.是否是引物设计有问题/造成非特异性扩增呢？如果是的话就重新设计引物吧，很便宜的。 3.第三，你可以把目的条带切割下来，回收后用作模板，二次扩增，这样如果是非特异性扩增的话基本可以去除。 简单给几点建议，希望对你能有多帮助，如有问题，可以继续讨论！ |
3楼2012-10-05 23:49:51
2楼2012-10-05 18:49:09
自然_法则
银虫 (初入文坛)
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4楼2012-10-08 18:45:47