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heshengfa木虫 (小有名气)
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我刚开始做原核表达，我的表达菌是BL21(DE3)，蛋白（GST标签）是可溶性的，目前在细菌破碎方面遇到些问题，想请教一下各位前辈。 1、我想问问大家对裂解液有什么好的建议。 2、溶菌酶溶液能在-20度保存多久。大家的工作浓度是根据菌的湿重来定吗？ 3、cocktail是现配现用吗，使用浓度是多少？ 4、大家裂解后还超声吗，工作条件是多少？ 由于是新手，问的问题有点多，希望各位不吝赐教，看回答情况会加金币。最后祝大家节日快乐。谢谢 |
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cicelyzh
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2楼2012-09-29 15:58:18
reallpf
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【答案】应助回帖
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amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-09-29 18:48:38
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说点个人见解： 1.裂解液一般也是缓冲液的作用，在裂解细胞的同时也要保证合适的环境。个人认为这个不是特别重要（不过也要看你的实验粗放程度了  ），之前用水也做过，没有很大的不同。至于合适的裂解液，一般文献中都会有涉及到，可以试试。2.对于胞内蛋白，本人一般不用溶菌酶裂解细胞。 3.也没有必要现配现用，一般4度保存是不会有很大问题的。主要是保证pH不能有很大变化，另外有没有结晶或絮状物出现等问题。 4.一般都是裂解液配合超声破碎，也可以用加玻璃珠振荡破碎。如果你只是为了检测，可以超声破碎也可以振荡破碎。如果是为了后续实验，能够用振荡破碎觉得会更好。玻璃珠用的是425-600um的，一般的生物公司都有卖，有点贵，一支酶的价钱吧，sigma的是160元/10g。 |
3楼2012-09-29 17:24:27
heshengfa
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4楼2012-10-01 09:44:03
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5楼2012-10-01 09:44:47
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6楼2012-10-02 00:54:46
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7楼2012-10-02 00:56:30
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8楼2012-10-02 09:34:04
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9楼2012-10-05 09:35:42
30