| 查看: 845 | 回复: 8 | |||
heshengfa木虫 (小有名气)
small minds discuss people;
|
[求助]
表达
|
|
我刚开始做原核表达，我的表达菌是BL21(DE3)，蛋白（GST标签）是可溶性的，目前在细菌破碎方面遇到些问题，想请教一下各位前辈。 1、我想问问大家对裂解液有什么好的建议。 2、溶菌酶溶液能在-20度保存多久。大家的工作浓度是根据菌的湿重来定吗？ 3、cocktail是现配现用吗，使用浓度是多少？ 4、大家裂解后还超声吗，工作条件是多少？ 由于是新手，问的问题有点多，希望各位不吝赐教，看回答情况会加金币。最后祝大家节日快乐。谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
求调剂
已经有4人回复
-
一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂
已经有3人回复
-
调剂310
已经有4人回复
-
北科281学硕材料求调剂
已经有16人回复
-
一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂
已经有6人回复
-
一志愿哈工大，085400，320，求调剂
已经有4人回复
-
316求调剂
已经有9人回复
-
085600 材料与化工 329分求调剂
已经有8人回复
-
0856求调剂
已经有6人回复
-
299求调剂
已经有4人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 4
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2012-09-29 15:58:18
reallpf
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 150 (高中生)
- 金币: 3388.3
- 散金: 2
- 红花: 12
- 帖子: 342
- 在线: 72.6小时
- 虫号: 1892494
- 注册: 2012-07-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-09-29 18:48:38
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-09-29 18:48:38
|
说点个人见解： 1.裂解液一般也是缓冲液的作用，在裂解细胞的同时也要保证合适的环境。个人认为这个不是特别重要（不过也要看你的实验粗放程度了  ），之前用水也做过，没有很大的不同。至于合适的裂解液，一般文献中都会有涉及到，可以试试。2.对于胞内蛋白，本人一般不用溶菌酶裂解细胞。 3.也没有必要现配现用，一般4度保存是不会有很大问题的。主要是保证pH不能有很大变化，另外有没有结晶或絮状物出现等问题。 4.一般都是裂解液配合超声破碎，也可以用加玻璃珠振荡破碎。如果你只是为了检测，可以超声破碎也可以振荡破碎。如果是为了后续实验，能够用振荡破碎觉得会更好。玻璃珠用的是425-600um的，一般的生物公司都有卖，有点贵，一支酶的价钱吧，sigma的是160元/10g。 |
3楼2012-09-29 17:24:27
heshengfa
木虫 (小有名气)
small minds discuss people;
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4007.5
- 散金: 354
- 红花: 2
- 帖子: 221
- 在线: 154.6小时
- 虫号: 1383942
- 注册: 2011-08-30
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
4楼2012-10-01 09:44:03
heshengfa
木虫 (小有名气)
small minds discuss people;
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4007.5
- 散金: 354
- 红花: 2
- 帖子: 221
- 在线: 154.6小时
- 虫号: 1383942
- 注册: 2011-08-30
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
5楼2012-10-01 09:44:47
loop00
木虫 (小有名气)
阿凡达
- BioEPI: 1
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 1553.3
- 散金: 15
- 红花: 2
- 帖子: 299
- 在线: 109.9小时
- 虫号: 466614
- 注册: 2007-11-24
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
6楼2012-10-02 00:54:46
loop00
木虫 (小有名气)
阿凡达
- BioEPI: 1
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 1553.3
- 散金: 15
- 红花: 2
- 帖子: 299
- 在线: 109.9小时
- 虫号: 466614
- 注册: 2007-11-24
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
7楼2012-10-02 00:56:30
heshengfa
木虫 (小有名气)
small minds discuss people;
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4007.5
- 散金: 354
- 红花: 2
- 帖子: 221
- 在线: 154.6小时
- 虫号: 1383942
- 注册: 2011-08-30
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
8楼2012-10-02 09:34:04
heshengfa
木虫 (小有名气)
small minds discuss people;
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4007.5
- 散金: 354
- 红花: 2
- 帖子: 221
- 在线: 154.6小时
- 虫号: 1383942
- 注册: 2011-08-30
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
9楼2012-10-05 09:35:42
