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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于DNAzyme 形成
汕头大学海洋科学接受调剂
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海贝14

银虫 (小有名气)

[求助] 关于DNAzyme 形成

据文献报道，DNA在Hg2+稳定的条件下可以形成G-四链体，G-四链体可以与hemin结合形成具有辣根过氧化物酶活性的的DNAzyme.很多文献都说在90℃或95℃下退火5-10min后，冷却到室温，这里我想请教两个问题：1.是把DNA一直加热直到90℃或95℃，然后退火5-10min,还是等到温度升到90或95℃，然后退火5-10min。2.冷却到室温,是逐渐冷却还是快速冷却，逐渐冷却时部分互补的双链DNA是不是会复性？
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1楼 2012-09-27 13:36:12
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杜保群

金虫 (小有名气)

专业微流控

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
呵呵  不是搞这方面不知道  路过  顶一下 愿楼主早日解决之。
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需要微流控相关的都可以找我 杜15911012041
2楼2012-09-27 13:42:15
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海贝14

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 杜保群 at 2012-09-27 13:42:15
呵呵  不是搞这方面不知道  路过  顶一下 愿楼主早日解决之。

谢谢。
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3楼2012-09-27 13:43:40
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gifttakuya

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
海贝14: 金币+20, ★★★很有帮助, 很有帮助。 2012-09-27 21:27:04
回答：
1：把DNA一直加热直到90℃或95℃，然后退火5-10min；
2：应该逐步冷却，也有报道是立即冷却的，但是应该和你做的核酶体系不一样。
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4楼2012-09-27 16:48:17
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海贝14

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gifttakuya at 2012-09-27 16:48:17
回答：
1：把DNA一直加热直到90℃或95℃，然后退火5-10min；
2：应该逐步冷却，也有报道是立即冷却的，但是应该和你做的核酶体系不一样。

你好，我还有些不明白，我看文献南开的孔德明教授组用的是heat to 90℃而长春应化所的汪尔康院士组的文章用的是heat at 90℃，所以我就迷茫了，请问你做过这样的课题吗？
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5楼2012-09-27 18:27:54
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hb410

金虫 (初入文坛)
hemin与适当的DNA序列就可以形成具有过氧化物酶活性的DNAzyme
汞离子不是必须的 除非需要特殊的目的
建议先将水浴加热到90度 再将样品放入5-10min 再将水浴关闭 让其自然冷却即可
用PCR仪器更好 可以设置盖子温度高于90度 这样样品就不会挥发了 而且也可以控制降温速率
这些条件很容易尝试 做些对照试验很快就可以掌握的
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海贝14
开心每一天
6楼2012-09-27 22:26:08
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海贝14

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by hb410 at 2012-09-27 22:26:08
hemin与适当的DNA序列就可以形成具有过氧化物酶活性的DNAzyme
汞离子不是必须的 除非需要特殊的目的
建议先将水浴加热到90度 再将样品放入5-10min 再将水浴关闭 让其自然冷却即可
用PCR仪器更好 可以设置盖子温度 ...

我用DNA链是为了测汞的，非常感谢你的指点。
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7楼2012-09-28 10:00:48
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sooin

银虫 (小有名气)
应该是在90-95度 保持加热10min以解链，再逐步降温至室温，DNAzyme在缓冷的条件下自发形成。 猝冷的情况也有文献报道，不过用缓冷的多，楼主也可以自己做对照，看哪种情况好。

请问楼主用的是ABTS 还是鲁米诺？
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8楼2012-09-28 14:30:05
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361440594

木虫 (小有名气)

大神
回答一：直接将水加热至90或95℃，然后讲DNA样品放入，变性，退火5-10min。
回答二：冷却至室温时候是逐渐冷却的。
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Hero
9楼2012-10-17 21:57:02
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yangxiaomo

银虫 (小有名气)
同意9楼
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10楼2021-10-14 14:52:30
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