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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 背景不均匀，老板表示结果无效，求可能原因和解决方法。
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wangfeideren

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] 背景不均匀，老板表示结果无效，求可能原因和解决方法。

如题。
另 ECL全膜孵育1分钟，应该不是ECL孵育不全的问题

图片1.png
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1楼 2012-09-26 15:03:32
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wangfeideren: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2012-09-26 15:21:36
每孔样品是什么 需要标注下 蛋白大小 好似特异性条带还是有 就是背景很深 二抗后用TBST多洗几次 或者每次时间延长点
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生物化学与分子生物学
2楼2012-09-26 15:08:24
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lengjing1986

木虫 (正式写手)

博士

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 鼓励新虫发帖 2012-09-27 06:11:55
wangfeideren: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢谢谢 2012-09-27 19:47:22
这个问题很好解决啊，最可能的就是二抗浓度过大了，一般一抗浓度过高没太大影响。你将二抗稀释比加大，1:20000使用，背景应该能出去。再者，将ECL稀释使用，用PBS稀释，背景会消除的。想你这种图，根本拿不出台面的。如果我爆住这样的图就直接扔掉，免得影响心情。
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超越别人并不高贵，真实的高贵是超越过去的自己。
3楼2012-09-26 22:54:27
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lengjing1986

木虫 (正式写手)

博士

【答案】应助回帖

这个问题很好解决啊，最可能的就是二抗浓度过大了，一般一抗浓度过高没太大影响。你将二抗稀释比加大，1:20000使用，背景应该能出去。再者，将ECL稀释使用，用PBS稀释，背景会消除的。想你这种图，根本拿不出台面的。如果我爆住这样的图就直接扔掉，免得影响心情。
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超越别人并不高贵，真实的高贵是超越过去的自己。
4楼2012-09-26 22:54:57
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david0308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wangfeideren: 金币+1, ★有帮助, 好的 我再试试 2012-09-27 19:47:55
其实很简单的，你的膜整个背景都是脏的，第一有可能的是抗体问题，你得问问其他用这个抗体的人是不是也有同样的状况，一个好用的抗体对于实验是十分有帮助的。再有可能的就是你的transfer buffer 或者TBST太脏了，应该及时换掉，前一段时间我们实验室也出这样的问题了，我们换掉重新配置就OK了。或者也可以多洗有一段时间，如果你确定你的TBST没有问题的话。
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哈哈
5楼2012-09-27 10:43:14
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stratchclyde

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2012-10-06 06:26:22
wangfeideren: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2012-10-06 23:14:59
应该是二抗浓度过高，或者TBST洗的时间太短了。
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6楼2012-10-06 03:38:42
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