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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌BL21菌株表达目的蛋白时，菌液破碎前后的浑浊程度变化很不明显
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老地方

金虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌BL21菌株表达目的蛋白时，菌液破碎前后的浑浊程度变化很不明显

大肠杆菌BL21菌株表达目的蛋白时，菌液破碎前后的浑浊程度变化很不明显，然后就抱着试试看的心态去纯化我的目的蛋白，结果什么都没纯化到。我怀疑是破碎效果不好，但是我用压力破碎也无济于事，而且我破碎含另一个目的基因的大肠杆菌BL21菌株时，很快就变的很澄清了。请问大家遇到过这种情况没？帮我解解疑惑吧，谢谢。
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攀科学高峰
1楼 2012-09-23 18:45:39
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很可能都是包涵体吧，建议跑跑电泳看看...
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2楼2012-09-23 19:48:49
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wadecao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2012-09-23 19:56:39
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王家大成

木虫 (正式写手)

囧囧小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
浑浊程度变化不明显，极有可能是包涵体了，所以没有纯化到。跑一个全细胞的电泳看看条带吧。
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一念起，万水千山；一念灭，沧海桑田！
4楼2012-09-24 09:38:33
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般来说，菌体破碎很快变澄清的可能是没有表达蛋白或者表达的蛋白可溶性很好，而表达的蛋白以包涵体形式存在的通常破碎后仍然很浑浊。可以试试把破碎后的沉淀和上清分离后分别上样跑SDS-PAGE，最好加上携带空载体的BL21的沉淀和上清作为对照，看看蛋白到底有无可溶性表达，再确定后续的工作。
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5楼2012-09-24 10:02:17
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zhoumz0520

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感受态不行了；或者培养基中菌密度太高，溶氧过低会导致你的状况~类似包涵体，其实不是
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6楼2013-05-01 19:52:06
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