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爱莫若月

木虫 (小有名气)

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[求助] 关于柱层析，点板~

本人小硕，近期在做一株生防细菌的活性物质分离~遇到一些问题还望各位赐教啊~
1.常说的点板，也就是点硅胶板的时候用的展开液和喷板的时候那个溶液，我看到不同的文献和实验室用的都不一样，想问问这个是怎么确定的啊？不同的溶剂有什么区别？怎么才能把这个板做好呢？
2.看到很多文献就是用不同的有机溶剂去萃取，想知道不同的溶剂里萃取的东西有什么区别呢？每一种大概能萃取到什么东西呢？比如乙酸乙酯，石油醚，正丁醇，萃取到的分别是什么呢？怎么才能把我的菌里面的东西都覆盖萃取到呢？
3.关于硅胶柱，凝胶柱，反相柱这三个分别有什么功能呢？优点和缺点是怎样的？怎么配合才能起到比较好的作用呢？还有就是怎么上样，制备样品呢？
4.关于柱子，我看了一些资料，柱子的种类很多，一看就晕了~这个又该怎么选择呢？不同的有啥区别呢？
5.如果这些想跟其他的手段联用，该怎么弄呢？比如加上液质联用，HPLC等等
由于本人完全是个新手，老板安排了这部分内容又不得不做，所以问题问的比较幼稚的还望见谅啊~不过我觉得对于一个初学者，可能很多人也会遇到这样的问题，所以，如果有比较在行的朋友~还请多多指教啊~如有经典的书籍或者文献，能分享的那就最好了！小弟先谢谢各位了~

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1楼 2012-09-23 13:48:50

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ywj1986

铜虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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★
karl2100: 金币+1, 谢谢回帖！ 2014-01-12 01:37:39

个人感觉你现在最该关心的就是你们实验室用的是什么柱子。根据柱子的性质再进一步确定下一步的展开剂得问题。比如说硅胶柱，属于弱酸性的。我们一般有薄层色谱硅胶板，还有用硅胶粉自己装的硅胶柱。做植化的还会有大孔树脂的，等等。对于硅胶柱，我们用的展开剂都是正向的，极性小得物质走的最快，极性大的物质在后面最后出来。展开剂的比例也是需要自己一点点摸索的。根据薄层板Rf值的大小，来调节相应的展开剂比例。大柱子的展开剂极性一般比走薄层板的小1.5-2倍。

对于液质联用，我用的是反向展开剂。极性大的东西先出来，极性小的后面出来，可以根据物质的出峰时间，以及所对应的M来判定你需要的物质出来的顺序。
不知道你是用哪一种类型的一起要来分离你的产物。总之所有的东西都需要你根据实际情况实际分析。
正如楼上所说，你问的这些东西其实很多书上都有