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liu58yeying金虫 (小有名气)
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[求助]
提高血浆前处理回收率
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请问一下大家，我在做一个化合物的空白血浆回收率测定实验。现在回收率竟然低到10%左右，但不知道问题出来哪里。化合物有两个酚羟基，应该略显酸性，并且有一个较长的脂肪链，估计极性偏小。我的处理方法如下：1. 加入蛋白沉淀剂。 2. 混匀超声。3. 13000 r/min 离心。4 取上清。5. 旋干并复溶 进样HPLC。 我感觉这个化合物的血浆蛋白结合率会很高吧，是在离心的这一步，化合物都被裹在下面的不溶物里面了。应该怎样提高回收率呢, 是不是要调整一下PH呢（比如加入低浓度的盐酸），或者增加超声时间？ 刚刚做代谢，请多指教啊，谢谢。 |
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wangyuanji
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liu58yeying
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3楼2012-09-21 19:16:22
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还是建议试一下液液萃取，将血浆酸化，加10%的甲酸10~20ul。因为你的化合物是酸性的，调整水相PH低于化合物2~3个PH，理论上是可以提高回收率的。 |
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liu58yeying4楼2012-09-27 13:01:04