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Bella0224

金虫 (小有名气)

[求助] 总是无法提出植物DNA,快哭了。。。

用康宁公司的提植物DNA试剂盒,怎么也提不出来,液氮磨了20分钟了,手快烂了.。。。

跑胶除了marker其他地方地点亮带都木有,上样5微升,按理说不少了啊。。。为毛就木有DNA呢。。。

到底是哪里的原因啊???!!!!
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Bella0224

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by andyleier at 2012-09-25 13:01:44
用液氮研磨只要组织破碎就好了,没规定时间。冰浴时间一定要控制好,不能振荡,要不就DNA就断裂了。手在拿离心管时候注意拿离心管口端,不能拿离心下面,防止降解。

还要冰浴么?试剂盒上木有写啊。。。
13楼2012-11-07 09:48:14
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查看全部 18 个回答

junminh

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
图贴上看下,1)液氮研磨加3次左右液氮,把组织研磨成粉沫状就OK了,并不需要说20分钟,认为越久磨的越好;2)你提的是啥组织,起始样本量是多少,肯定有啥原因。
2楼2012-09-20 19:12:36
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5266720

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyfgood: 金币+5, 很有帮助,鼓励新虫多多应助交流! 2012-09-25 23:13:38
Bella0224: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-20 13:05:20
不知道你的植物是什么,研磨后加液体水浴时,一定要注意不要剧烈震荡,所有过程也不要震荡。要轻微震荡,要是基因组DNA裂解了,那样只有一条模带,有的试剂盒也不好,不一定每次都提的出来,我以前用过天根的就经常提不出来,现在用VVI的,别的同学帮我研磨也有的提不出来,我自己研磨的就都提出来了,你要找找手感,我现在提基因组 能够把握度了,每次基本都能提出来。你上样量也不多,我都是10微升。3ulbuffer。。你也可以试试别的方法提。希望能够帮助你
3楼2012-09-23 14:09:38
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

楼主提DNA用来做什么呢?如果只是简单做做PCR,用Edwards法即可,这几天我验证T-DNA,每天提上百个样品,没见有问题。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2012-09-24 21:02:51
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