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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 大家好,在RT的时候,如果加入RNA的量远远超过了试剂盒所规定的,会有什么影响?

试剂盒中要求的最大合成量是1ug,我前几天加过了4.5ug,结果跑胶的时候出来假阳性,而且只有假阳性,目的条带都没有,RNA质量检测OD比值为2.1,这种情况下是不是由于RNA的量太多,杂合链中的RNA还是没有除去,杂合链影响了PCR的扩增影响呢?????请解释一下
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fhj20050708

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-19 15:04:39
可能还是楼主的rna质量不太好吧,我上次消化DNA后浓度是7100ug/ml,260/280=1.97,260/230=2.2,反转录时加入的总rna=3.55ug,另一管总rna=2.13ug(TAKARA的反转录酶),反转录时rna多加得到的cdna进行pcr后目的基因条带的亮度要高于后者pcr产物。
8楼2012-09-19 08:39:53
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cxfans

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这倒不至于把 RNA纯度不好会影响
2楼2012-09-17 10:30:58
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人觉得还是你的RNA质量不是太好,OD比值2.1是OD260/280还是OD260/230呢?
持之以恒、永不放弃!
3楼2012-09-17 16:31:02
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-17 16:31:02
个人觉得还是你的RNA质量不是太好,OD比值2.1是OD260/280还是OD260/230呢?

OD260/280的比值是2.1   OD260/230的是1.8,我现在感觉只要OD260/280的比值超过了2.0,就很难出来好的结果啊!就是他两的比值是1.6也比比值是2.1的要好啊!
4楼2012-09-17 16:34:14
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