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a71840584

金虫 (正式写手)

[求助] ROS数据

我用DCFH-DA法测植物的ROS,最后在522nm下的吸光度值是20多(稀释10倍的,我的蛋白含量*酶液=0.1),处理组是没染毒的,师哥师姐测鱼的也是20-50不等,测蚯蚓的相对高点,20-150不等,怎么判断这些数据对不对呢?还是测出来数据就可以用来分析?有对DCFH-DA法比较了解的吗?或者谁看过关于植物ROS的文章他们测的都是多少?粘几篇给我看看吧,我英语不好查文献都费劲。。。。
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
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a71840584

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-09-12 15:50:00
只要操作没有问题,就按照你自己做出来的数据分析。我印象中没见过像你这样用荧光分光光度计测DCHFDA的,得你自己查查了。另外,别人文献报道也不好参考,实验材料,仪器,体系不同,都会造成结果很大不同,尤其是测 ...

我们用的试剂盒是这个
http://www.beyotime.com/reactive-oxygen/ros-assaykit.htm
再看看这个
http://www.biorun.net/article_view.asp?id=71
还有这个网址的4楼也提到荧光分光光度计测
http://bbs.antpedia.com/thread-149993-1-1.html
这个方法应该没问题吧,实验室用好久了,要是不行的话告诉我我去告诉老板说:你们这个方法是错的在老板面前显摆下
再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
4楼2012-09-13 15:53:27
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-09-12 18:32:52
a71840584: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-09-14 11:02:22
只要操作没有问题,就按照你自己做出来的数据分析。我印象中没见过像你这样用荧光分光光度计测DCHFDA的,得你自己查查了。另外,别人文献报道也不好参考,实验材料,仪器,体系不同,都会造成结果很大不同,尤其是测ROS
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-09-12 15:50:00
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a71840584

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-09-12 15:50:00
只要操作没有问题,就按照你自己做出来的数据分析。我印象中没见过像你这样用荧光分光光度计测DCHFDA的,得你自己查查了。另外,别人文献报道也不好参考,实验材料,仪器,体系不同,都会造成结果很大不同,尤其是测 ...

好的谢谢你啊,对于用用荧光分光光度计测ROS我是有的,有文献,也有个网站讨论过这个,我发你网址你抽空看一眼(里面有提到用荧光分光光度计测完读数的)
http://www.dxy.cn/bbs/topic/3106645
这个网站里有人提到的那个步骤和我们基本一样,先磨样取线粒体,再测蛋白确定加的酶液量和PBS量(探针量固定加10μL,总样品体积3mL),37℃水浴完去荧光分光光度计测,我们电脑上这个程序是设定好的,包括波长什么的,然后读数。基本思路就这样。
再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
3楼2012-09-13 15:33:16
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by a71840584 at 2012-09-13 15:53:27
我们用的试剂盒是这个
http://www.beyotime.com/reactive-oxygen/ros-assaykit.htm
再看看这个
http://www.biorun.net/article_view.asp?id=71
还有这个网址的4楼也提到荧光分光光度计测
http://bbs.antpedia ...

不能说这个方法错,但直接荧光分光光度计测DCFH-DA的方法我一般只见到做动物的人用,做植物没印象这么干的,很难说是不是植物细胞中有什么东西会造成干扰。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
5楼2012-09-13 20:29:18
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