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wujibifan

新虫 (小有名气)

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[求助] 求助-基因的突变文库相关问题已有1人参与

给位大侠，小弟最近在构建一个基因的突变文库，具体流程是：先克隆该基因，连到一个穿梭载体上，测序确定该基因后，进行易错PCR，来得到该基因的突变体，然后和之前同样的载体连接，转化大肠杆菌，进而构建突变文库。
现遇到的问题：转化率太低，每次转化就长几个菌，导致文库的容量不够，没有代笔性。
求助：请各位大侠帮帮我，我该在那些地方改进呢？我已验证酶切效果很好，转化过程中设置了阳性对照，转化也很好，估计是连接过程出问题？目的片段与载体的摩尔比很重要吗？用哪个公司的连接酶效果会好些？我用过TAKARA，Promega的，效果都差不多。缓冲液失效了？

[ Last edited by 1949stone on 2012-9-13 at 07:43 ]

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