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snoopyzxx木虫 (著名写手)
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哺乳动物细胞表达究竟是用瞬时表达还是稳定表达啊？
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我现在有个项目是想用哺乳动物细胞表达一个重组蛋白，目的是大量生产，做商业用途。 那么， 1、目前最常用的表达系统和载体是什么啊？我知道的比较常用的有CHO、VERO等，那么human cell作为宿主的有哪些？看到很多商品化的蛋白是用“human cell”表达出来的，但没写具体哪种cell。 2、是用瞬时表达还是稳定表达呢？两者有何区别，分别用在哪些方面啊？比如瞬时表达用作功能研究？ 3、 |
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snoopyzxx
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
snoopyzxx: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-12 13:52:41
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-12 16:06:13
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| 常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。 |
2楼2012-09-12 11:56:23