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zlfok00

新虫 (小有名气)

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[交流] lcms建立标准曲线时，浓度级变了，如何保证分离效果？

利用lcms进行多成分分析定量，我个人的实验路线是这样的：先摸索色谱条件，然后确定洗脱梯度，之后摸索质谱条件。等条件都选定后，我想进行几个梯度浓度试验（在前期计划里设定的浓度梯度从5ng-2000ng，我在里边选了6个浓度进样：5、20、100、500、2000ng/ml），进样标准品看一下定量效果，结果问题出现了！因为lc条件摸索时是采用的较高浓度，较低进样量，得到了较好分离，然而在进行梯度浓度进样时，低浓度检测不到，高浓度无法分离，峰叠加严重，保留时间改变，EIC结果出现双峰… 于是加大进样体积，问题任然没有得到解决…
本人新手，刚接触这方面，不知道其他前辈是如何让解决这一问题的，还望不吝赐教！谢谢呢！

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1楼 2012-09-07 11:44:57

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zlfok00

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

5楼: Originally posted by zhangxuan200 at 2012-09-07 13:42:45
质谱不要求分离度啊，只要质荷比能分开就行。
你的重点是灵敏度，只要达到灵敏度问题不大，需要优化源参数和电压参数，具体自己摸索吧。注意上限浓度太大可能还会饱和，适当减少进样量。

谢谢指教！
还是不太清楚，参数已经逐个优化了，主要是每种检测物质EIC都有两个峰，一分半钟一个，另一个与条件摸索的保留时间相近。
上限浓度饱和是怎么回事呀？谢谢~~