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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR100多次无法解决的难题
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bin120

铜虫 (初入文坛)

[求助] PCR100多次无法解决的难题

各位PCR高手,小弟遇到一个难题,我做普能PCR做了100多次,还是没有P出来,情况大概是这样的,同一逆转录条件,同一引物,同一mix,同一PCR反应条件,就是提取RNA(提取的RNA质量相当好)的细胞不同,结果是别人P的是一条带,我P的是多条带,我还换了4对引物,换了三种mix,结果都是这样,哎,郁闷!我也问了好多博士,硕士,分子生物学的老师,留学归来的大牛都没能给我解决!丁香园上是否有高手出来指点一下,小弟不胜感激.
这里有图(http://www.dxy.cn/bbs/topic/23800647)
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多个朋友,多一份成功的机会
1楼 2012-09-07 01:37:28
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qiaoxianying

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能是模板浓度高了，适当降低一下浓度试试
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2楼2012-09-07 06:32:57
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hellokkzhu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的图打不开
你有没有PCR的时候带一个别人的样品？结果如何？
有没有让同学帮忙做过你的样本？有没有重提过RNA？
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3楼2012-09-07 09:06:27
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sunjp

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
相同的条件，不一样的结果，就要从不一样的地方进行分析。提取的RNA浓度是否一样，不同细胞表达的基因是否存在差异，祝你早日找到问题所在。
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4楼2012-09-07 09:16:30
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andyzhengwp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以在你p出来的多条带里找出符合你那段基因大小的带回收，然后测一下序，在设计一个特异性引物，祝顺利
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每天坚持一点点，终会成功！相信自己
5楼2012-09-07 09:22:28
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bin120

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hellokkzhu at 2012-09-07 09:06:27
你的图打不开
你有没有PCR的时候带一个别人的样品？结果如何？
有没有让同学帮忙做过你的样本？有没有重提过RNA？

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多个朋友,多一份成功的机会
6楼2012-09-07 09:52:34
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bin120

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qiaoxianying at 2012-09-07 06:32:57
有可能是模板浓度高了，适当降低一下浓度试试

你是说降低CDNA人量吗？？
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多个朋友,多一份成功的机会
7楼2012-09-07 09:54:07
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bin120

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sunjp at 2012-09-07 09:16:30
相同的条件，不一样的结果，就要从不一样的地方进行分析。提取的RNA浓度是否一样，不同细胞表达的基因是否存在差异，祝你早日找到问题所在。

我是测了RNA浓度的，然后均衡后在逆转录，也有人说是细胞的问题，但是换了细胞后，还是这样，不过都是膀胱癌细胞
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多个朋友,多一份成功的机会
8楼2012-09-07 09:56:02
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bin120

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by andyzhengwp at 2012-09-07 09:22:28
你可以在你p出来的多条带里找出符合你那段基因大小的带回收，然后测一下序，在设计一个特异性引物，祝顺利

呵呵，国外的那个大牛也是这样说
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多个朋友,多一份成功的机会
9楼2012-09-07 09:56:26
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的引物是怎么来的，要不要你让别人做一次你的实验看看
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生物化学与分子生物学
10楼2012-09-07 10:12:23
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