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阿蒙and阵阵

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR问题

我想问一下,最近在做基因组的PCR,总是P不出来,用的体系都是之前别人用过的,以前能做出来,但是我做不出来,不知道是哪里的问题,请大家指导一下
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lifefly

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-09-07 13:31:39
你的基因组是提了多久了?如果时间长了的话可能是会有问题的,至于你的引物首先要确保没有拿错,还有你加入的时候的量要注意,有些微量操作时你要确保你的引物有没有加好,一般我们做PCR都是用PCRmix的,如果你也是这样,这一块我觉得应该没问题,然后你PCR设置程序时如果直接用的前人的程序时,你要看看注意退火温度,延伸时间,或许别人有可能改动过。
11楼2012-09-07 10:20:12
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zishilanxuan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也是一样,我的目的基因是1900左右,昨天p出来一个500左右的,顺便问一下,我这个可能是什么问题呢?
2楼2012-09-06 09:40:10
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
体系是很重要,P不出来也是因为基因不同吧。建议将引物和dNTP的量加大点;另外你的PCR程序也可以做适当调整。祝好运!!
持之以恒、永不放弃!
3楼2012-09-06 09:44:29
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by zishilanxuan at 2012-09-06 09:40:10
我也是一样,我的目的基因是1900左右,昨天p出来一个500左右的,顺便问一下,我这个可能是什么问题呢?

我当初做的时候一次设计了三对引物,如果你的引物特异性不强,可能P出不同的结果,即使你用同样的体系,同样的程序,我碰到过。祝好运!!
持之以恒、永不放弃!
4楼2012-09-06 09:46:51
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