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m606

铜虫 (正式写手)

[求助] berthelot比色法测定发酵液中的γ-氨基丁酸,发酵液遇苯酚变浑浊已有1人参与

如题,测定标样时没有问题,但是发酵液遇苯酚后变浑浊后面结果无法测定,怎么解决呢?
应该是发酵液中的蛋白质等大分子变性,试过TCA除蛋白,先加苯酚沉淀离心,但是结果还是浑浊
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Wpy_宇

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by m606 at 2013-09-06 11:03:26
berthelot测定方法,一般参考一个文献即可,我做标准曲线没问题,就是发酵液没法测定,这个问题我也没有解决,我现在用液相了,祝你好运...

最后你选择的具体方法是哪一个呀?我现在做标准曲线,做不出来。不显色,测出来的值很不对

发自小木虫IOS客户端
9楼2017-12-05 23:00:26
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pipibaby

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
m606: 金币+5, 有帮助, 谢谢! 2012-09-06 08:44:31
zhang8826857: MicEPI+1, good,lz反馈有帮助,而且回答的很用心,epi一枚 2012-09-08 10:04:14
1. 可以把苯酚的用量和时间 再 重新确定一下
2. 可以把发酵液用真空过滤网过滤过,相当于再次提纯一下,除掉一些小分子的杂质
3. 去除蛋白后 也可以考虑过滤一下,小分子的就不要用了
4. 不知道你的实验具体是如何操作的,但是,如果涉及到温度的话,最好控制一下, 或者参考一下相关文献,改变你的温度,以免蛋白变性
5.  还有就是把你用到的最初最初的原料很仔细的提纯后再进行下面一步的实验,实验过程中的每个试验参数都要很仔细的去考量,
6. 离心的速度和时间要控制一下
7. 实验过程中,要确保操作空间的无菌

只能想到这么多,希望对你能有帮助
2楼2012-09-06 00:35:41
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m606

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pipibaby at 2012-09-06 00:35:41
1. 可以把苯酚的用量和时间 再 重新确定一下
2. 可以把发酵液用真空过滤网过滤过,相当于再次提纯一下,除掉一些小分子的杂质
3. 去除蛋白后 也可以考虑过滤一下,小分子的就不要用了
4. 不知道你的实验具体是如 ...

很感谢您,实验中试剂和条件的控制都是有参照的,只是苯酚遇到发酵液肯定会浑浊,那就只好处理发酵液了,这样这个方法也太麻烦了,请问你做过类似的实验吗,当时遇到过这样的问题吗
3楼2012-09-06 08:49:30
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pipibaby

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by m606 at 2012-09-06 08:49:30
很感谢您,实验中试剂和条件的控制都是有参照的,只是苯酚遇到发酵液肯定会浑浊,那就只好处理发酵液了,这样这个方法也太麻烦了,请问你做过类似的实验吗,当时遇到过这样的问题吗...

我没做过类似的实验,但是我做过很多的别的方面的类似的实验,所以,出现问题的时候,我会想到从这些方面着手去考虑,先解决几个问题再说

做实验时很费时间的,有的时候做了一两个月,出来的结果还不尽如意

另外,可以建议你,你做实验的时候,试验周期如果比较长的话,你可以考虑平行做几组实验,这样,其中一组如果不小心污染了,还有备份的

不知道你具体做的是什么,我以前做细胞培养和药物缓释的时候 是平行几组做的,因为细胞的培养周期比较长,这样,即使 期间有的被污染了,我还有备份,不用重头来过

还有就是 你用的苯酚是生物实验级用的吗?这个最好不要用工业级,用纯度高的实验级的

祝好运

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4楼2012-09-07 00:29:48
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