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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶连问题
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代号47

新虫 (初入文坛)

[交流] 酶连问题

双酶切后，酶连遇到一些问题：在连接过程中，按照一定规则进行加样，10ul体系反应，每次都连不起来，我一开始是12小时过夜，后来是16个小时过夜，都没有成功，我怀疑是片段自连，请问在两个片段都加进pcr管中后怎样让其不发生自连，然后再加酶反应，是58° 10min中，然后放冰上，还是？
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1楼 2012-09-04 15:09:19
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dshlove

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-05 13:50:03
用Promega的fastAP处理后回收，基本就很少自连接了。
两个片段加上T4连接酶，16℃，30分钟足够了。
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2楼2012-09-04 15:47:02
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