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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DGGE 求助
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feiniao333

铜虫 (初入文坛)

[求助] DGGE 求助

本人刚刚开始做DGGE，做的是功能基因，mcrA，变性区间是30-60.100V，跑了13个小时，条带太多太乱，怎么改进呢

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1楼 2012-08-29 09:11:57
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feiniao333

铜虫 (初入文坛)
顶起来
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2楼2012-08-30 10:55:20
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feiniao333

铜虫 (初入文坛)
求高手现身
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3楼2012-08-30 10:56:12
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feiniao333

铜虫 (初入文坛)
胶是6%的，好像背景也特别深，是不是loading buffer加多了
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4楼2012-08-30 10:57:38
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是胶的问题，另外PCR产物是不是一般？有无GC夹子
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5楼2012-09-01 08:42:39
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-09-02 07:37:33
没跑开吧，或者你的样品本身包含序列太多，或者染色的原因？
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但行好事，莫问前程
6楼2012-09-01 10:19:09
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jozsh

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wizardfan: 金币+3, 特别鼓励新虫发帖交流 2012-09-02 07:37:11
条带没跑开，建议缩小范围~不知道用什么染色GELRED 还是ＳＹＢＥＲＧＲＥＥＮ。应该和ＢＵＦＦＥＲ没关系
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交流~
7楼2012-09-01 17:30:27
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feiniao333

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 在雨中 at 2012-09-01 08:42:39
应该是胶的问题，另外PCR产物是不是一般？有无GC夹子

PCR产物很亮的，这是加了GC夹的，点样点了20ul，测的产物浓度能到500多ng/ul
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8楼2012-09-02 09:24:14
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feiniao333

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jozsh at 2012-09-01 17:30:27
条带没跑开，建议缩小范围~不知道用什么染色GELRED 还是ＳＹＢＥＲＧＲＥＥＮ。应该和ＢＵＦＦＥＲ没关系

用的ＳＹＢＥＲＧＲＥＥＮ染色30分钟，以前一个师兄还让我们先固定15分钟呢
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9楼2012-09-02 09:27:41
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feiniao333

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 20093651 at 2012-09-01 10:19:09
没跑开吧，或者你的样品本身包含序列太多，或者染色的原因？

染色就是用的ＳＹＢＥＲＧＲＥＥＮ染的，应该问题不大吧
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10楼2012-09-02 09:28:58
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