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sgn311铜虫 (小有名气)
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[求助]
关于甲羟戊酸途径中一个关键酶酶活测定方法，求指导
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以前没有测过酶活，这次做的实验中要测一个酶活。但是查阅的文献有地方看不明白，所以请教大家。原文如下：The assay of MDD was based on that previously described with minor modification。The following components were incubated in a 1.0-ml cuvette: 0.1 M Tris buffer, pH 7.5, 0.16 mM NADH, 5 mM MgCl2, 4 mM ATP, 10 μg MDD, 0.5 mM phosphoenol pyruvate, 29 units of pyruvate kinase, and 37 units of lactate dehydrogenase. The measurement of enzyme activity was carried out at 25 °C on a Hitachi U-2001 UV/Vis dual beam spectrometer. The background rate of NADH oxidation was measured for 2 min, and then 36 μM mevalonate 5-diphosphate was added. The reaction was monitored for another 2 min. One unit of enzyme activity was defined as the amount of enzyme required to convert 1 μmol of mevalonate 5-diphosphate to product per minute. Determination of the KM and the Vmax was performed using the same assay buffer with one substrate concentration fixed while varying another substrate concentration. 文中的反应体系中还要加酶，而且是制定酶活的酶，这个该怎么做呢。谢谢大家 |
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