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dxli1988

金虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by chjinzhi at 2012-08-28 10:54:05
你要是知道退火温度就不用啦！我是试了很多温度，后来就试烦了，干脆touchdwn了。...

恩，谢谢啦
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逆水行舟，不进则退。
21楼2012-08-28 14:15:51
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by dxli1988 at 2012-08-27 15:46:48
是前辈啊，呵呵，“我常用的是在第一轮在一较高的温度退火后，72度延伸10min。”这句话是什么意思呢？做了很久，也有不少人给建议，就是没做出来，...

就是预变性94  5min后，先来一轮94   30s  55 30s 72  10min  再接下来正常跑个30循环。不知明白否，有必要的话  可以加273986569
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22楼2012-08-28 21:48:56
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海尤希

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by muscle920 at 2012-08-28 01:09:55
muscle920
很正确，第一步胶回收，可以一比一的进行提供第二步的模板，延伸时间由长片段决定，注意第二步除了引物外其余的都加，可以循环10个cycle，后延伸10 min，不用电泳，直接取10 ul用作第三步PCR的模板，第 ...

“直接取10 ul用作第三步PCR的模板”，问一下总体系是多少，模版量会不会太多？是否有按这样的模版加样量成功的经历？
赞一下 回复此楼
冷静、加油。
23楼2012-08-31 11:39:15
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