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dxli1988

金虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by chjinzhi at 2012-08-28 10:54:05
你要是知道退火温度就不用啦!我是试了很多温度,后来就试烦了,干脆touchdwn了。...

恩,谢谢啦
逆水行舟,不进则退。
21楼2012-08-28 14:15:51
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by dxli1988 at 2012-08-27 15:46:48
是前辈啊,呵呵,“我常用的是在第一轮在一较高的温度退火后,72度延伸10min。”这句话是什么意思呢?做了很久,也有不少人给建议,就是没做出来,...

就是预变性94  5min后,先来一轮94   30s  55 30s 72  10min  再接下来正常跑个30循环。不知明白否,有必要的话  可以加273986569
22楼2012-08-28 21:48:56
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海尤希

新虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by muscle920 at 2012-08-28 01:09:55
muscle920
很正确,第一步胶回收,可以一比一的进行提供第二步的模板,延伸时间由长片段决定,注意第二步除了引物外其余的都加,可以循环10个cycle,后延伸10 min,不用电泳,直接取10 ul用作第三步PCR的模板,第 ...

“直接取10 ul用作第三步PCR的模板”,问一下总体系是多少,模版量会不会太多?是否有按这样的模版加样量成功的经历?
冷静、加油。
23楼2012-08-31 11:39:15
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