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betty

金虫 (正式写手)

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[交流] 微生物菌种的复壮

用甘油管保存的菌由于时间较长，且已经传代多次了，需要从甘油管里选出酶活较高的菌。经过平板涂布、划线分离挑出单菌落、种子和发酵培养基后竟然测不出酶活了，这过程中会出现什么问题呢？（甘油管的菌都是有酶活的）

这个实验已经跟同学重复几遍了，都没有结果。且平板上长出的单菌落形态基本相似，也从划线平板上挑出多株单菌落做多组实验，依然没有结果。

请各位高手指教这过程中有什么问题，如果有什么好的复壮方法也望不吝赐教！

[ Last edited by betty on 2012-8-24 at 18:49 ]

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1楼 2012-08-24 18:47:36

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reallpf

木虫 (正式写手)

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★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
betty: 金币+3, 甘油管的酶活倒是有的，就是里面的菌可能不够纯，所以用平板划线纯化，但是经过纯化的单菌落没酶活 2012-08-31 14:31:02

我的菌发酵前也都会进行活化，如果做大罐还有一级种子和二级种子。还没有碰到过酶活丢失的情况。稍弱倒是会存在。你活化的也没有酶活的话你看要不多活化几次？如果你的酶的底物能作为碳源或氮源的话，试试选择培养基活化看看，应该可以的。
另外你说过你的甘油管极影经过多次传代了，利用pcr检验一下你的目的基因是否丢失了。不过这个可能性很小，一般发酵用的宿主都是可以稳定遗传很多代的。