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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微生物菌种的复壮
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betty

金虫 (正式写手)

[交流] 微生物菌种的复壮

用甘油管保存的菌由于时间较长，且已经传代多次了，需要从甘油管里选出酶活较高的菌。经过平板涂布、划线分离挑出单菌落、种子和发酵培养基后竟然测不出酶活了，这过程中会出现什么问题呢？（甘油管的菌都是有酶活的）

这个实验已经跟同学重复几遍了，都没有结果。且平板上长出的单菌落形态基本相似，也从划线平板上挑出多株单菌落做多组实验，依然没有结果。


请各位高手指教这过程中有什么问题，如果有什么好的复壮方法也望不吝赐教！

[ Last edited by betty on 2012-8-24 at 18:49 ]
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1楼 2012-08-24 18:47:36
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reallpf

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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betty: 金币+3, 甘油管的酶活倒是有的，就是里面的菌可能不够纯，所以用平板划线纯化，但是经过纯化的单菌落没酶活 2012-08-31 14:31:02
我的菌发酵前也都会进行活化，如果做大罐还有一级种子和二级种子。还没有碰到过酶活丢失的情况。稍弱倒是会存在。你活化的也没有酶活的话你看要不多活化几次？如果你的酶的底物能作为碳源或氮源的话，试试选择培养基活化看看，应该可以的。
另外你说过你的甘油管极影经过多次传代了，利用pcr检验一下你的目的基因是否丢失了。不过这个可能性很小，一般发酵用的宿主都是可以稳定遗传很多代的。
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15楼2012-08-31 14:26:39
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841790061

银虫 (著名写手)
★ ★
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betty: 金币+1, 是不是菌株在活化时没长好？ 2012-08-25 12:30:03
我从菌中保藏中心买来的菌种复水后，在平板上都过了三四天一点现象也没有，不知道咋整的？

另外，针对你的问题，我不太懂。
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2楼2012-08-24 21:57:03
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★ ★
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betty: 金币+1, 我们的菌一直都是经过种子、发酵两个阶段的，两种培养基的基本成分类似 2012-08-25 12:31:44
必须经历种子阶段吗？我的菌如果搞种子，再接种酶活力就很低了。
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3楼2012-08-25 00:04:01
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tapmun

木虫 (著名写手)
★ ★
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betty: 金币+1 2012-08-25 12:35:38
我从菌种保藏中心买回来的菌，发酵之后也没活下来，不知道为何
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4楼2012-08-25 00:42:19
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