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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[交流] 原核表达载体的构建已有17人参与

我第一次接触原核表达载体的构建 就一直连接不成功 回收后的目的片段和表达载体做电泳都有单一条带,二者连接液没有任何条带(我用的是宝生物胶回收试剂盒,DNA的浓度特别低,怀疑是这个原因) 无法判断是否连接成功 。前两次直接做转化也没有任何菌长出来,继续帮助,实验停滞了 谢谢啦。。。。
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sd3824289

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-08-24 10:53:21
虫有啊  你们在胶回收之前的双酶切 质粒都加多少啊 反应体系是多少  急需 谢谢赐教...

反应体系:
质粒:5μL
E1   :0.5μL
E2   :0.5μL
buff :1μL
dd水:3μL
共10μL
坚持,就像流星,即使知道最后的结果,也要勇敢的走到最后!
11楼2012-08-25 09:06:26
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cliakro

木虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
"继续帮助"…… 强!虫子立起!
2楼2012-08-23 09:59:19
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cliakro

木虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不懂哇……路过的爬过……
3楼2012-08-23 10:00:05
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09丁于飞

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做转化没有任何菌长出来,说明转化有问题,不能确定连接结果如何。另外,DNA回收产物跑胶能看到带,说明DNA浓度足够作连接了。
一般不会用连接液跑胶。
4楼2012-08-23 13:43:33
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