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刁寒冰
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之前做的PCR产物送到上海英峻那边去测序,就是单一条带,750bp,然后测序结果是上游出现后双峰,而下游测通了,有点糊涂了!想问知道的大虾,咋回事呢?
还有我另一个条带测序,得到序列后去NCBI-blast嗯,但还是没有结果,反向序列也试过,还是比对不出来呢?不知怎么回事呢?
[
Last edited by 刁寒冰 on 2012-8-22 at 15:07
]
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2012-08-22 14:05:45
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4楼
:
Originally posted by
刁寒冰
at 2012-08-23 10:49:17
你的意思是说,我只用反向测出的序列对比的话,在确定一下,那没有正向的序列跟对比结果没有影响吗?...
你可以咨询一下测序公司,他那边可以通过Walking来达到测通目的的,这个肯定是可以测出来的
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6楼
2012-08-23 12:09:36
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jingdejun
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2012-08-23 15:53:25
测序的事情我不是很清楚,所以就回答你后面的问题。
你说比对没有结果,我估计是你选类别的时候选错了,比如做的是微生物却选择了与人类的基因比较。这样的话,肯定是没有结果的啊!
不知道是不是这个原因。不过假如不是新基因的话,应该就是这个原因没错了,也是我经常犯的错。
希望有点帮助。
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2楼
2012-08-22 16:33:01
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2012-08-23 15:53:40
后面的问题,楼上已经帮你解答了,我回答前面的吧,你的正向引物可能适合常规扩增,但是并不适合测序,因为测序对引物要求高点,然后你的反向引物测通的意思就是你的反向引物是可用的,你先比对一下,是不是你要的序列,它可能靠近引物的几十个bp不太准确
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3楼
2012-08-23 08:38:55
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引用回帖:
3楼
:
Originally posted by
jl860822
at 2012-08-23 08:38:55
后面的问题,楼上已经帮你解答了,我回答前面的吧,你的正向引物可能适合常规扩增,但是并不适合测序,因为测序对引物要求高点,然后你的反向引物测通的意思就是你的反向引物是可用的,你先比对一下,是不是你要的序 ...
你的意思是说,我只用反向测出的序列对比的话,在确定一下,那没有正向的序列跟对比结果没有影响吗?
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4楼
2012-08-23 10:49:17
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