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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[交流] 质粒提取 已有10人参与

为什么质粒提取的时候 加裂解液II的时候 ，没有拉丝现象 ，最后提取完nano检测浓度偏低，做电泳没有带，谢谢回帖帮助
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1楼 2012-08-18 12:29:37
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-08-20 14:00:45
1ml的菌液如果可以的话肯定是有质粒的，最少的做过0.5ml的都有拉丝现象。如果不拉丝我觉得可能是染菌了。因为不管大肠杆菌中有没有质粒，都会有拉丝现象。有的说拉丝是由于细胞的裂解，也有的说拉丝是由于细菌中染色体DNA造成了溶液粘稠现象。不拉丝还有一个现象是你溶液2中NaOH失效了，重新配制后用。
有些参考书上写的是如果加入sol2没有拉丝现象，质粒提取实验可以停止不做了。
希望对楼主有帮助。
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10楼2012-08-20 08:42:33
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普通回帖

xiongyaoling

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2012-08-18 21:56:26
加裂解液II，溶液应该是变清吧，加裂解液3，会有白色沉淀出现，我用天根试剂盒抽的都是这样，
还有你确实你的菌有质粒吗？
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2楼2012-08-18 18:21:25
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烟涛微茫

铁杆木虫 (文坛精英)

卡牌大师
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼上说的是，加溶液三才有沉淀啊

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心之所善，九死未悔
3楼2012-08-18 18:42:37
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiongyaoling at 2012-08-18 18:21:25
加裂解液II，溶液应该是变清吧，加裂解液3，会有白色沉淀出现，我用天根试剂盒抽的都是这样，
还有你确实你的菌有质粒吗？

我今天重做了一次 估计是没有连接成功所以没有质粒
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4楼2012-08-19 09:41:06
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王贤卓

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
AXyGEN试剂盒比较好
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5楼2012-08-19 10:19:22
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resurgam

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1、加裂解液II的时候 ，没有拉丝现象可能是第一步收集菌液的时候收集的太少，一般都是收3-5ml的。收1ml浓度又低确实不会有拉丝现象。
2、连接完涂板后先挑十几个单菌落摇摇然后做菌液电泳吧，可能是阳性的再扩大摇摇提质粒进一步鉴定，节约时间哈
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6楼2012-08-19 10:45:19
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代号47

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们都是手提质粒，现在的人什么都是试剂盒，我比较赞同手提！提质粒要注意动作缓慢，充分混匀。
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7楼2012-08-19 15:24:42
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chenhuize

木虫 (正式写手)
混匀了吗？
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8楼2012-08-19 17:45:43
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bbwalkman

木虫 (小有名气)
重新做一次试试吧，看好说明书呢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2012-08-19 21:26:30
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