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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[交流] 质粒提取 已有10人参与

为什么质粒提取的时候 加裂解液II的时候 ,没有拉丝现象 ,最后提取完nano检测浓度偏低,做电泳没有带,谢谢回帖帮助
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-08-20 14:00:45
1ml的菌液如果可以的话肯定是有质粒的,最少的做过0.5ml的都有拉丝现象。如果不拉丝我觉得可能是染菌了。因为不管大肠杆菌中有没有质粒,都会有拉丝现象。有的说拉丝是由于细胞的裂解,也有的说拉丝是由于细菌中染色体DNA造成了溶液粘稠现象。不拉丝还有一个现象是你溶液2中NaOH失效了,重新配制后用。
有些参考书上写的是如果加入sol2没有拉丝现象,质粒提取实验可以停止不做了。
希望对楼主有帮助。
10楼2012-08-20 08:42:33
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普通回帖

xiongyaoling

金虫 (小有名气)

★ ★
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amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流! 2012-08-18 21:56:26
加裂解液II,溶液应该是变清吧,加裂解液3,会有白色沉淀出现,我用天根试剂盒抽的都是这样,
还有你确实你的菌有质粒吗?
2楼2012-08-18 18:21:25
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烟涛微茫

铁杆木虫 (文坛精英)

卡牌大师


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楼上说的是,加溶液三才有沉淀啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
心之所善,九死未悔
3楼2012-08-18 18:42:37
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiongyaoling at 2012-08-18 18:21:25
加裂解液II,溶液应该是变清吧,加裂解液3,会有白色沉淀出现,我用天根试剂盒抽的都是这样,
还有你确实你的菌有质粒吗?

我今天重做了一次 估计是没有连接成功所以没有质粒
4楼2012-08-19 09:41:06
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王贤卓

金虫 (正式写手)


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AXyGEN试剂盒比较好
5楼2012-08-19 10:19:22
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resurgam

木虫 (著名写手)


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1、加裂解液II的时候 ,没有拉丝现象可能是第一步收集菌液的时候收集的太少,一般都是收3-5ml的。收1ml浓度又低确实不会有拉丝现象。
2、连接完涂板后先挑十几个单菌落摇摇然后做菌液电泳吧,可能是阳性的再扩大摇摇提质粒进一步鉴定,节约时间哈
6楼2012-08-19 10:45:19
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代号47

新虫 (初入文坛)


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我们都是手提质粒,现在的人什么都是试剂盒,我比较赞同手提!提质粒要注意动作缓慢,充分混匀。
7楼2012-08-19 15:24:42
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chenhuize

木虫 (正式写手)

混匀了吗?
8楼2012-08-19 17:45:43
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

重新做一次试试吧,看好说明书呢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2012-08-19 21:26:30
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