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清水一杯

新虫 (初入文坛)

[求助] 启动子替换

我最近准备做一个试验,希望通过替换出发菌株的启动子,构建一株目的基因簇高水平表达的工程菌。
基本试验设计:利用double cross-over同源整合,在外源启动子两侧分别加入靶标启动子的5'和3'序列。
问题:利用上述方法,电激转化出发菌株后能否成功获得启动子被替换的重组工程菌?
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-15 20:49:35
貌似是可以的,算是一个同源重组。但是需要经过单交换--双交换的过程(也可能直接双交换一步完成,但是概率很低),问题是你要电转化的质粒能不能在宿主里稳定存在、传代。另外上游和下游同源序列的长度在几百~1000bp比较合适。
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
2楼2012-08-15 18:59:20
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