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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 14kd的蛋白，做westernblot，电转条件是怎样的
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yxperfect

新虫 (初入文坛)

[求助] 14kd的蛋白，做westernblot，电转条件是怎样的

小分子量蛋白，14kd，1.5mm的胶
电转条件：250mA，湿转，3h30min。
结果只能看到最小分子量26kd的预染Marker，其他大分子量的marker还是看得很清晰的。
是不是转过了啊，，，怎么调整条件，胶有点厚。
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1楼 2012-08-14 17:00:42
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gaorongbest

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2012-09-07 06:10:40
引用回帖:
9楼: Originally posted by loop00 at 2012-09-06 10:03:41
我以前做湿转的时候35kD蛋白，60V，144mA 45min Very Good；
建议你减小电压，缩短时间，再查查你的NC膜截留分子量是多少，能不能做14KD，建议使用0.2umNC膜，不要用0.45的

你的蛋白35KD，144mA 45min 就能转好？用的是预染Marker吗？我们曾有一次用200mA 2h，最后胶上还留着Marker呢！
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11楼2012-09-06 14:07:15
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yxperfect

新虫 (初入文坛)
★
wizardfan: 金币+1, 要平时多发帖交流，别临时抱佛脚的来求助。 2012-09-02 07:39:34
做完sds-page，预染Marker的条带都能看到的，包括，11,17两条。。样品的量不多了，所以不能摸条件了。。各位大仙，求经验了~~~~
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2楼2012-08-14 17:04:15
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小韩韩

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-08-31 19:32:27
配制15%的胶或梯度胶，1.0mm就行，转印时用湿转60V恒压，一直转两个小时。注意转的过程中电流不要高于180mA。
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3楼2012-08-31 09:33:20
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-08-31 19:32:42
200mA 应该也没问题，一直这样效果也挺不错的
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4楼2012-08-31 10:04:02
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