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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 审稿意见--求合理的解释
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学大生物

铜虫 (著名写手)

[求助] 审稿意见--求合理的解释

审稿意见：
For vector construction, it is not clear if the authors use genomic DNA or cDNA to amplify the region containing ORFs. It seems that genomic DNA was used. Any particular reasons for doing that? Why not use cDNA?

我克隆到了一个水稻的基因，为了验证它的功能，我对其进行了转基因互补实验。Genomic sequence length: 4837 nucleotides； CDS length: 747 nucleotides
当初我构建互补载体的时候是选取该基因ATG前面的2000bp左右作为自身启动子，TAG终止子后大约1000多bp作为3‘端，包括全长的基因组序列，共7000多bp的片段，连入到2300空载体中（不含启动子），构建得到互补载体。

现在审稿人问我为什么不选择cDNA进行互补实验？我该怎么回答才好呢？谢谢高人指点！
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。。。。。。
1楼 2012-08-09 22:35:32
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-10 13:45:26
是不是通过突变体克隆的这个基因，然后通过互补实验证实表型变化是否是突变体引起的？如果是，就比较简单，可以告诉他，利用包含启动子、编码区和终止子序列的基因组序列做回补实验，是考虑最大程度不改变基因的表达模式来恢复突变体。如果用cDNA的话，可能会影响转录后的加工，对表达可能有影响。
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学大生物
2楼2012-08-10 05:43:01
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学大生物

铜虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-10 05:43:01
是不是通过突变体克隆的这个基因，然后通过互补实验证实表型变化是否是突变体引起的？如果是，就比较简单，可以告诉他，利用包含启动子、编码区和终止子序列的基因组序列做回补实验，是考虑最大程度不改变基因的表达 ...

是的，我觉得这个解释很合理，当初就是想最大程度的互补它的表型，可是这个审稿人很挑剔一样，问了很多的问题。谢谢你的回答。
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。。。。。。
3楼2012-08-10 08:23:39
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