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【转贴】非蛋白氮的测定
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非蛋白质氮的测定 用凯氏法测定蛋白质的含氮量相当恒定(约14％一18％)，平均含量约为16％。因此， 蛋白质氮乘以6.25％即为蛋白质含量。如果实验需要时，也可以用以下方法直接测定。测定的流程是，称取0.2—0.5g风干的植物材料，放入100m1烧杯中，加入50ml水，煮沸5min，在40—50℃下保温30min。徐徐加入10ml6％硫酸铜，摇匀，静置l h(或过夜)。过滤，残渣按凯氏定氮法将残渣消化，蒸馏，测定收集液中氨，计算得出含氮量。 非蛋白质氮包括溶于水的氮化物，如氨基酸、酸性氮和有机含氮碱等。其总量可以按总 氮减去蛋白质氮计算得出，也可以按下法测定，即：称取0.2—0.5g植物样品，放入研钵中加2m1水，研磨成匀浆态。加入3ml 3％硫酸铜溶液，摇匀，匀浆转移到离心管内，同时以8ml水冲洗净残渣。离心管放入沸水中，用玻璃棒搅拌3min。取出加入3m10.2mol/L的Na0H，搅匀，静放10min，离心。将溶液放入100m1凯氏瓶中，用热水冲洗沉淀2次，每次用10m1，每次冲洗时要向冲洗的水中加人l滴3％的硫酸铜溶液。然后向凯氏瓶的浸出物中加入2m1浓硫酸，O.3m110％钼酸钠(10gNa2Mo04•2H20溶解于100m1水中，加入0.5m12mol/LNaOH，加热至沸，并煮沸15min，冷却后补充无氨水100m1)，4滴3％过氧化氢。放在电炉上蒸发，直至出现泡沫，然后降低温度以免泡沫溅到瓶颈上。继续用微火加热直至硫酸出现白色蒸汽。之后用球形玻璃塞塞上凯氏瓶口，增强火力，消化到溶液透明为止。冷却后向瓶中残留物加入10m1水。溶液转人50m1容量瓶中，用水冲洗残渣，并补加水到50m1，混匀。取25ml溶液放人烧杯中滴定。加l滴0.1％甲基橙溶液，冷却后，以2mol/LNa01粤溶液滴定，直到指示剂呈现黄色为止，不能滴定过头。然后加10m1含有溴酸钾的pH 6.7的磷酸缓冲液和5m10.12mol/L氯氨溶液(15g氯氨溶于水中，用水稀释到1L，混匀，用棉花过滤后，装入暗色瓶中)，即用玻璃盖盖住烧杯，以圆周运动方式将溶液混匀，并静置25min，其后加入2m12％碘酸钾溶液，10m18％草酸溶液。在有淀粉指示剂存在下，用0。02mol/L硫代硫酸钠溶液滴定释放出来的的碘。lml0.02mol儿的硫代硫酸钠相当于0。09338mg氮。另按此法设不加样品的对照，操作步骤完全与上相同。最后按下面公式计算样品中的非蛋白氮含量。 X(非蛋白氮含量％)＝[0.4667×50×K×(6z一6)1／(25×7n) ＝[0.9338×K×(a-b)]／72 式中：50为试液体积(ml)；25为用氯氨法测定时所取试液的体积(m1)；a为滴定对照所用去的0.02mol儿硫代硫酸钠体积(ml);b为滴定试液所用去的0.02mol/L硫代硫酸钠体积(ml)；K为硫代硫酸钠溶液的滴定度372为分析的样品重(g)。 [ Last edited by laizuliang on 2007-9-24 at 08:57 ] |
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