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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » protein hplc assay discuss
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zkydc810307

铜虫 (小有名气)

[交流] protein hplc assay discuss 已有2人参与

我看了下本版，发现专题讨论都很精彩，但是蛋白的HPLC assay这一块好像非常少但是我感觉这块对蛋白的实际商业化其实是很重要的。因此这里开一贴，抛砖引玉，请各位同仁来讨论蛋白的HPLC assay问题
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把蛋白纯化研究成操作工都能干的活
1楼 2012-08-08 14:22:47
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xbqewpq

荣誉版主 (著名写手)

魂兮
★
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楼主你的砖呢，先抛一块啊
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红颜远，相思苦，几番意，难相付。十年情思百年渡，不斩相思不忍顾！
2楼2012-08-08 14:42:23
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zkydc810307

铜虫 (小有名气)
有很多同仁就遇到这个情况，即使是电泳上显示一条带的蛋白，做HPLC是很可能不止一个峰，而且每次跑的峰图都不一样，没法重复
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把蛋白纯化研究成操作工都能干的活
3楼2012-08-08 15:33:51
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cpn

木虫 (正式写手)
★
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只看HPLC么？会不会蛋白部分变性了？并且电泳的分辨率，我个人感觉应该是不如HPLC的。
纯化的蛋白的均一性好像也是一个问题额。
说的有点笼统。
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4楼2012-08-08 20:01:56
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zkydc810307

铜虫 (小有名气)
HPLC是分析不是制备，所以无所谓是否变性，SDS-PAGE就是一变性电泳，电泳的分辨率确实不如HPLC，但是灵敏度比HPLC要稍微高一点
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把蛋白纯化研究成操作工都能干的活
5楼2012-08-08 20:16:00
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cpn

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
呵呵刚刚说的不完整，我说的电泳确实是指SDS-PAGE，不是还有CE么，这个的分辨率可就高多了。
不知道lz有没有考虑过一些蛋白的翻译后修饰的问题，或者举个更具体的，比如说做重组蛋白，翻译的起点都是Met，但是这个met确实存在会被水解掉的问题，那些有修饰和没修饰的，有带met没带met的，对于一个蛋白随便都是上万的分子量来说，SDS-PAGE的区分度确实有限。因此偶认为即使胶上一个条带，HPLC跑出来多个峰也是有可能的。不过蛋白的HPLC分离偶没做过，不知道分辨率能达到一个什么样的程度。
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6楼2012-08-08 20:38:47
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