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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主的PCR产物有杂带,这样的情况下酶切完做个胶回收比较保险些。最近做克隆也一直不顺,一个做了两周才成功,一个俩月都没结构,希望多交流经验~~~
11楼2012-08-04 16:51:29
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ankang0910

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-09 14:24:38
引用回帖:
10楼: Originally posted by 475502411 at 2012-08-04 14:25:38
1.我的目的条带是PCR扩增出来的,当时没有看,直接回收的,但回收完有拖带
2.酶切得到的是不是比680bp大,没看出来,测序结果还没出来...

哦,那你是直接纯化的寡核苷酸是吗?肯定还是切胶回收的好一些呀,为什么不跑胶回收呢?PCR后、回收前有没有跑胶鉴定一下,说不定也是拖带呢,降低一下模板再试试。祝好运!
实验顺利!!
12楼2012-08-04 16:53:42
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cmin126

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by luckyforus66 at 2012-08-01 16:02:59
实验室其他人用电转化时出过类似的问题,貌似用普通转化(热激转化)好一些。

我也出现了类似问题,目的片段是PCR产物,从基因组DNA P下来的。长的菌落很少,鉴定也都为假阳性,求教啊
13楼2012-08-04 20:48:14
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王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你可以再看看你的目的片段680bp中是否也有BamHI和HindIIII这两个酶的酶切位点。祝实验顺利!!
14楼2012-08-09 13:57:54
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山轻水秀

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也许你连接的比例有问题哦
万变不离其宗,以明确的计划,灵活的方法,创造属于自己的天地
15楼2012-08-09 16:27:12
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