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yuliansheng

金虫 (小有名气)

[求助] 高手请进,我已绞尽脑汁,也没想到答案!!!......

由于在分子生物这块了解的还不是太多,请教高手一问题。
       在对一细菌内的某段基因及其功能进行研究时,利用一实验方法把该目的基因删除。我用的实验方法最终会有两种产物:一种是不含目的基因的变异株(mutant);另一种是经过一系列的过程,目的基因又回到了细菌内的野生型(目的基因没有删除,wild type)。而根据最后细菌所表现出来的性状,可以得知这个wild type内部基因的某些点肯定发生了变化(性状有差别)。为了分析内部基因的变化,第一次我做了基因测序。但要分析的目的基因片段大概有4000bp左右,通过两侧的primer进行测序后,一共也大概能测到2000bp左右。中间的2000bp左右仍还不知道。我知道可以再在中间设计几个primer,再进行基因测序,就可以得知中间部分的序列。
       但我的老师给我出了个难题——现在不用基因测序,还可以用什么别的办法(实验方法)对这段基因进行分析,进而得知其内部序列点的变化。(前提:不知道这段基因会产生什么蛋白质,这段基因的功能还尚在推测中)。
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-01 12:35:33
这个没听过这么先进的技术,貌似,不在核酸水平上,也不在蛋白水平上

具体能用什么技术来检测我还不知道,但肯定是有,我老师让我自己先想想看,但我也想不出来。
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4楼2012-08-01 13:44:28
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by zhjichen at 2012-08-01 14:33:48
限制性长度多态性分析?
或者杂交分析?

能具体点吗?
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9楼2012-08-01 18:41:18
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-01 16:19:29
如果单从简单这方面讲的话,我感觉测序来分析是最简单有效的,至于您说的其他方法,我没想到,基础知识不太扎实...

是,我感觉也是,但我老师非得让我自己考虑,看有别的方法没。
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10楼2012-08-01 18:42:27
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

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8楼: Originally posted by somer2012 at 2012-08-01 18:05:27
DNA芯片好了,但是准确度低些,价格也不菲。

没做过,能具体点吗?
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11楼2012-08-01 18:43:29
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

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12楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-01 19:45:53
暂时没想到,连这个基因的功能和编码蛋白都不知道,我觉得这有点悬...

功能现在还正处在猜想中,不能太确定,所以才研究的,编码蛋白是真不知道。
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15楼2012-08-01 21:45:02
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

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16楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-02 08:15:55
多看看资料吧,或者上网问问有没在做这方面的...

好的,谢谢了
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25楼2012-08-02 22:07:12
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

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22楼: Originally posted by yulong4444 at 2012-08-02 15:39:22
如果发生了与原野生型不同的基因变化,肯定是局部的,最简单就是克隆测序啊,不用测序法还是比较难得。

是啊,据我所了解的,也是想做测序比较简单。所以现在有涉及到设计引物的问题了,欢迎回帖。
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26楼2012-08-02 22:36:42
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

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27楼: Originally posted by damaomao at 2012-08-03 09:00:33
难道是提取细菌的蛋白质  跑电泳  看看他们之间的差异吗
或是做杂交
咕~~(╯﹏╰)b我只想到这么多

现在这段基因能产生什么样的蛋白质还不知道,所以,提蛋白质分析不太可取。
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28楼2012-08-03 12:51:15
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