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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5‘RACE土法炼金~~~~~~~求建议
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)

[交流] 5‘RACE土法炼金~~~~~~~求建议

clotech的smart太贵，takara的5’反响不好，成功率很低，本虫想自己手动尝试下5‘

基本就是按照smart的原理，虽然不是真正意义上的RACE，但是满足实验要求已经足够。
1、接头引物就是smart说明书里面的oligo和5’cds
2、反转录试剂盒用fermentas，里面成分感觉更接近经典RACE的要求。
3、GSP当然自己设计。
大概就是这些，第一次没经验，希望熟悉的虫友给点建议，再此先谢过。
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tupac225

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1楼 2012-07-24 09:09:58
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
自己先顶一个！
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2楼2012-07-24 09:10:35
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tupac225

金虫 (正式写手)
★
wanghd2826(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
帮你顶一个。
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3楼2012-07-24 09:42:03
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)
★
wanghd2826(金币+1): 谢谢参与
你可以试一试看 我还是建议你用经典的5‘RACE方法 就是在5’端加尾的方法 会好些
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4楼2012-07-24 10:46:50
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 脱水拂空 at 2012-07-24 10:46:50
你可以试一试看 我还是建议你用经典的5‘RACE方法 就是在5’端加尾的方法 会好些

谢谢，经典RACE确实比较牢靠一点，我先试下。
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5楼2012-07-24 11:03:53
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yananhl

银虫 (小有名气)
★
wanghd2826(金币+1): 谢谢参与
同学我也有同样的苦恼，我用的接头的方法老是有非特异的条带，有单条带也不是自己的基因。烦啊！经典的方法怎么做呢?
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6楼2012-07-24 14:54:06
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yananhl at 2012-07-24 14:54:06
同学我也有同样的苦恼，我用的接头的方法老是有非特异的条带，有单条带也不是自己的基因。烦啊！经典的方法怎么做呢?

请问你是用的smart里面的接头引物么？经典的RACE技术在“PCR技术试验指南”这本书中就有，很详细。
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7楼2012-07-24 15:14:19
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yananhl

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wanghd2826 at 2012-07-24 15:14:19
请问你是用的smart里面的接头引物么？经典的RACE技术在“PCR技术试验指南”这本书中就有，很详细。...

恩，用经典的方法是不是很复杂？我没有这本书啊
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8楼2012-07-24 15:21:24
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yananhl at 2012-07-24 15:21:24
恩，用经典的方法是不是很复杂？我没有这本书啊...

不是很复杂，主要是原理不太一样。我只有第一版，感兴趣的话留个邮箱发给你自己研究下。
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9楼2012-07-25 09:56:39
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yananhl

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wanghd2826 at 2012-07-25 09:56:39
不是很复杂，主要是原理不太一样。我只有第一版，感兴趣的话留个邮箱发给你自己研究下。...

好啊，邮箱是yananhl@163.com
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10楼2012-07-25 10:59:34
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yananhl at 2012-07-25 10:59:34
好啊，邮箱是yananhl@163.com...

发过去了。
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11楼2012-07-26 09:56:02
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yananhl

银虫 (小有名气)
恩恩，收到！
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12楼2012-07-26 11:53:18
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