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wanghd2826

铁虫 (小有名气)


[交流] 5‘RACE土法炼金~~~~~~~求建议

clotech的smart太贵,takara的5’反响不好,成功率很低,本虫想自己手动尝试下5‘

基本就是按照smart的原理,虽然不是真正意义上的RACE,但是满足实验要求已经足够。
1、接头引物就是smart说明书里面的oligo和5’cds
2、反转录试剂盒用fermentas,里面成分感觉更接近经典RACE的要求。
3、GSP当然自己设计。
大概就是这些,第一次没经验,希望熟悉的虫友给点建议,再此先谢过。
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)



wanghd2826(金币+1): 谢谢参与
你可以试一试看 我还是建议你用经典的5‘RACE方法 就是在5’端加尾的方法 会好些
4楼2012-07-24 10:46:50
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 脱水拂空 at 2012-07-24 10:46:50
你可以试一试看 我还是建议你用经典的5‘RACE方法 就是在5’端加尾的方法 会好些

谢谢,经典RACE确实比较牢靠一点,我先试下。
5楼2012-07-24 11:03:53
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yananhl

银虫 (小有名气)



wanghd2826(金币+1): 谢谢参与
同学我也有同样的苦恼,我用的接头的方法老是有非特异的条带,有单条带也不是自己的基因。烦啊!经典的方法怎么做呢?
6楼2012-07-24 14:54:06
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by yananhl at 2012-07-24 14:54:06
同学我也有同样的苦恼,我用的接头的方法老是有非特异的条带,有单条带也不是自己的基因。烦啊!经典的方法怎么做呢?

请问你是用的smart里面的接头引物么?经典的RACE技术在“PCR技术试验指南”这本书中就有,很详细。
7楼2012-07-24 15:14:19
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yananhl

银虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by wanghd2826 at 2012-07-24 15:14:19
请问你是用的smart里面的接头引物么?经典的RACE技术在“PCR技术试验指南”这本书中就有,很详细。...

恩,用经典的方法是不是很复杂?我没有这本书啊
8楼2012-07-24 15:21:24
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
8楼: Originally posted by yananhl at 2012-07-24 15:21:24
恩,用经典的方法是不是很复杂?我没有这本书啊...

不是很复杂,主要是原理不太一样。我只有第一版,感兴趣的话留个邮箱发给你自己研究下。
9楼2012-07-25 09:56:39
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yananhl

银虫 (小有名气)


引用回帖:
9楼: Originally posted by wanghd2826 at 2012-07-25 09:56:39
不是很复杂,主要是原理不太一样。我只有第一版,感兴趣的话留个邮箱发给你自己研究下。...

好啊,邮箱是yananhl@163.com
10楼2012-07-25 10:59:34
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普通回帖

wanghd2826

铁虫 (小有名气)


自己先顶一个!
2楼2012-07-24 09:10:35
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tupac225

金虫 (正式写手)



wanghd2826(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
帮你顶一个。
3楼2012-07-24 09:42:03
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
10楼: Originally posted by yananhl at 2012-07-25 10:59:34
好啊,邮箱是yananhl@163.com...

发过去了。
11楼2012-07-26 09:56:02
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yananhl

银虫 (小有名气)


恩恩,收到!
12楼2012-07-26 11:53:18
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