应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量 相对定量 标准曲线的构建方法
31/1返回列表
查看: 2192  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

怀西扬

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量 相对定量 标准曲线的构建方法

打算做茶花某个基因的相对定量，用2-△△Ct方法分析。
1   构建标准曲线的目的只是为了单纯看目的基因引物和内参基因引物的扩增效率是否一致吗？
   有的文献里说，如果一致，比如说都是1.98，2-△△Ct应该订正为1.98-△△Ct？那要是不一致呢，该怎么办？
2 构建标准曲线的质粒需要检测浓度吗？我在一篇文献里看到如下内容：
测定质粒浓度并进行拷贝数换算，作为阳性模板。
(拷贝数计算公式是:拷贝数=(amount×6．022×1023)/(length×1×109×650)，其中amount是指OD所测含量，length代表模板DNA的长度)

另外，荧光定量中的阈值需要手工设置吗？还是说就按电脑默认值就可以了？

谢谢！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-07-23 15:35:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liweiwei0812

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
怀西扬: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-07-24 11:06:43
1. 相对定量中的用2-△△Ct方法分析时的标准曲线确实用于检测目的基因及内参基因的引物扩增效率，如果不一致，需要优化实验条件争取调到一致，或不要相差太多即可；
2. 相对定量的标准曲线没必要计算具体拷贝数，因为此标准品不用于绝对量的计算；
3. 荧光阈值一般为仪器默认值，如果有需要手动调整的情况需高于基线及阴性对照的荧光值，且在指数增长期范围之内。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-07-23 16:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
怀西扬: 金币+1, ★有帮助 2012-07-24 11:06:49
荧光定量中的阈值需要手工设置吗？还是说就按电脑默认值就可以了？关于这个，要看你的熟练程度了，一般机器默认值就行，熟练的话可以自己设定。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
3楼2012-07-23 16:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 怀西扬 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +9 yunziaaaaa 2026-03-01 10/500 2026-03-02 15:18 by 半截的诗0927
[考研] 0856化工专硕求调剂 +15 董boxing 2026-03-01 15/750 2026-03-02 15:06 by 晃晃不许晃
[考研] 303求调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-02 15:01 by 向上的胖东
[考研] 338求调剂 +3 18162027187 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:12 by houyaoxu
[考研] 材料与化工328求调剂 +3 。，。，。，。i 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:09 by houyaoxu
[考研] 材料工程274求调剂 +4 Lilithan 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:06 by yuchj
[基金申请] 此成果不能导入原因：元数据必填信息不完整，可 进行补充。 +4 Kittylucky 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:07 by jurkat.1640
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +6 wsl111 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:00 by ydudjddnd
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +6 kyf化工 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:56 by 无际的草原
[考研] 材料调剂 +6 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:42 by Jy?
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 材料类求调剂 +11 wana_kiko 2026-02-28 14/700 2026-03-02 08:46 by 聪明的大松鼠
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭