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荧光定量 相对定量 标准曲线的构建方法
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打算做茶花某个基因的相对定量，用2-△△Ct方法分析。 1 构建标准曲线的目的只是为了单纯看目的基因引物和内参基因引物的扩增效率是否一致吗？ 有的文献里说，如果一致，比如说都是1.98，2-△△Ct应该订正为1.98-△△Ct？那要是不一致呢，该怎么办？ 2 构建标准曲线的质粒需要检测浓度吗？我在一篇文献里看到如下内容： 测定质粒浓度并进行拷贝数换算，作为阳性模板。 (拷贝数计算公式是:拷贝数=(amount×6．022×1023)/(length×1×109×650)，其中amount是指OD所测含量，length代表模板DNA的长度) 另外，荧光定量中的阈值需要手工设置吗？还是说就按电脑默认值就可以了？ 谢谢！！！ |
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