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独立寒秋

木虫 (正式写手)

[求助] HPLC 求教!

各位高手  我在做一个糖脂,糖脂极易溶于在二氯甲烷中,在甲醇中溶解度很小,用HPLC分析 用的是C18的反相柱,分析型, 流动相用的的乙腈 水(均含有0.1%的乙酸)梯度洗脱 具体如下啊:开始50%乙腈+50%水  30分钟后100%乙腈+0%水     30-40分钟100%乙腈   50分钟后再回到50%乙腈+50%水。由于我的样品很容易溶解在二氯甲烷中,开始用二氯甲烷进样10 -20Ul  结果发现跑的很难看,并且前几分钟就出现很难看 并且吸光度很高的鬼峰,(分析可能是二氯甲烷和乙腈水体系不互溶,导致鬼峰)后来用甲醇溶解,上样就没问题,但是问题是样品在甲醇中溶解度很小,峰很小,效果不好,(增大进样量到140ul,效果也不是很好,峰很小)我现在想让高手帮忙,帮我选一个溶剂,能与乙腈水体系互溶,同时对我的样品溶解度很好,请大家帮忙,不胜感激。定重谢!
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houqian387

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
独立寒秋: 金币+20, 有帮助, 嗯 谢谢你 2012-07-23 08:23:30
独立寒秋: 金币+10, 有帮助, 非常感谢热心人 2012-07-23 14:40:51
首先试一下起始流动相比例(不加缓冲盐)对样品的溶解度好不好?

如果还不能溶解再试一下纯乙腈;还不行就用甲醇:二氯甲烷=1:1溶解性肯定没问题了,而且和流动相互溶
但要关注:当用纯溶剂:强度大于流动相起始比例的溶剂时就有可能发生溶剂效应。原因就是柱头扩散,离子状态等因素

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-07-23 07:26:49
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查看全部 10 个回答

zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
独立寒秋: 金币+10, 有帮助, 谢谢你 2012-07-23 08:23:02
既然之后使用乙腈作为mp,为何不试试乙腈或一定含量的乙腈溶解呢
Yesterday.Today,Tomorrow!
2楼2012-07-22 22:53:18
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独立寒秋

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhoucb at 2012-07-23 08:40:32

请问什么意思?
5楼2012-07-23 11:16:07
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zhouwenhui2000

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
独立寒秋: 金币+10, 有帮助, 谢谢 2012-07-23 14:38:53
soundhorizo: 金币+3, 感谢应助 欢迎常来啊 ^^ 2012-07-23 22:04:49
既然“糖脂极易溶于在二氯甲烷中”说明其极性很弱,使用C18反向柱建议提高乙腈在流动相中的比例。(最好用极性弱的溶剂)
送人玫瑰,手有余香。
6楼2012-07-23 13:59:05
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