24小时热门版块排行榜    

查看: 2173  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

chgoahead

新虫 (初入文坛)

[交流] pKD46 已有4人参与

我在做Red敲除,将pKD46电转入克雷伯氏菌中,点转之前对pKD46进行了PCR验证,有那三个功能基因,PCR产物大概1900多。但是转入克雷伯氏菌后,再提质粒进行PCR验证就没有1900的目的条带了,没有任何条带。电转前后质粒的电泳条带是一样高的
。我很困惑,不知道问题出在哪了?望虫友多多支招
回复此楼

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgoahead

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 灰血动物 at 2012-07-31 20:46:49
请问你使用氨苄浓度是i多少?

是100ug/mL的
8楼2012-09-04 09:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你确定pKD46这个质粒转入菌中了吗?pKD46是氨苄青霉素抗性,原始菌必须不能有氨苄青霉素抗性才行,这样才能筛选。另外,有时候可能是假阳性。
好孩子!
2楼2012-07-21 22:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008116068

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
pKD46,我做转化倒没遇到什么问题,但是老是重组不上
只要踮起脚尖,就离太阳更近一点!!!
3楼2012-07-22 10:21:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgoahead

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-07-21 22:52:45
你确定pKD46这个质粒转入菌中了吗?pKD46是氨苄青霉素抗性,原始菌必须不能有氨苄青霉素抗性才行,这样才能筛选。另外,有时候可能是假阳性。

嗯,转进去了。提出来的质粒大小一样。克雷伯氏菌具有氨苄抗性,但是当氨苄浓度达到300mg/ml时,克雷伯氏菌就不能生长了,所以我筛选转化子的氨苄浓度为300mg/ml。
4楼2012-07-22 10:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见