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cycici1028

木虫 (小有名气)

[交流] 提RNA加氯仿后不呈乳白色 求原因

提RNA加入氯仿后以前都是震荡呈乳白色的 这次用的氯仿加进去后不显乳白色 静置后有分层现象 但是是最下面略显澄清 中间层有气泡 上层为红色澄清 我以为是氯仿的问题 问别人借了氯仿加进去后还是一样 只有一个样品是和以前处理的正常样品一样 求高手解答 问题可能出在哪里啊
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1楼2012-07-20 13:59:21
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回帖置顶 ( 共有3个 )

fjtony163

版主 (文坛精英)
★
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
RNA提取时，加氯仿后分三层：水相(含rna,可能还有少量DNA），中间白色薄层（应该是蛋白和DNA），下层有机相（氯仿和蛋白等）
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19楼2012-07-20 16:12:22
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328533973

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-21 13:57:44
我当时是这样做的：向细胞培养瓶中加入1mLPBS，洗涤单层细胞，加入1 mlTRlzol培养，小心吹打加入1.5 mLEP管中。RT 5 min，加入0.2 mlCHCl3摇晃15 s，静置3 min。12000 g，4 ℃离心15 min。分三层：水相(含rna,可能还有少量DNA），中间白色薄层（应该是蛋白和DNA），下层有机相（氯仿和蛋白等）。
你的是不是裂解时间不够？还是加入氯仿后摇动太久，静置时间不够，导致蛋白分离效果不好，中层有气泡。
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23楼2012-07-20 17:00:30
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ankang0910

金虫 (正式写手)
★
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
加完氯仿应该充分涡旋，然后冰浴静置10分钟再离心。
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24楼2012-07-20 19:50:55
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普通回帖

希米兔

铁虫 (初入文坛)
★
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
是不是研磨的问题啊
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2楼2012-07-20 15:15:59
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sesame_oil

荣誉版主 (文坛精英)
★
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
不明白
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4楼2012-07-20 15:30:08
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精品画廊

新虫 (初入文坛)
★
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
buqingchu
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12楼2012-07-20 15:45:16
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精品画廊

新虫 (初入文坛)
听课
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14楼2012-07-20 15:46:27
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ankang0910

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
顺便鄙视那些光赚金币而不作任何解答的伪虫友！
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25楼2012-07-20 19:52:36
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cycici1028

木虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 328533973 at 2012-07-20 17:00:30
我当时是这样做的：向细胞培养瓶中加入1mLPBS，洗涤单层细胞，加入1 mlTRlzol培养，小心吹打加入1.5 mLEP管中。RT 5 min，加入0.2 mlCHCl3摇晃15 s，静置3 min。12000 g，4 ℃离心15 min。分三层：水相(含rna,可能还 ...

我裂解的时间肯定是很长了 因为是两块板一起处理的 第一个样品加氯仿后觉得不对 又去找别的氯仿 其他操作和你基本是一样的 加氯仿后静置时间超过5min
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26楼2012-07-21 08:53:02
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wmjqy

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-24 13:51:35
引用回帖:
19楼: Originally posted by fjtony163 at 2012-07-20 16:12:22
RNA提取时，加氯仿后分三层：水相(含rna,可能还有少量DNA），中间白色薄层（应该是蛋白和DNA），下层有机相（氯仿和蛋白等）

你吹打了多少时间？出现这种情况可能是裂解不完全或者rna讲解。但是你这提的总RNA不可能全部讲解了啊？也许是你加的trizol量不够或吹打时间不够。另外还有加入氯仿后应该剧烈震荡15秒或者上下颠倒15秒。你试试看。如果还是不行的话，估计是你的细胞有问题了，是不是细胞已经死了！？？？
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27楼2012-07-21 12:04:11
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fjtony163

版主 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
27楼: Originally posted by wmjqy at 2012-07-21 12:04:11
你吹打了多少时间？出现这种情况可能是裂解不完全或者rna讲解。但是你这提的总RNA不可能全部讲解了啊？也许是你加的trizol量不够或吹打时间不够。另外还有加入氯仿后应该剧烈震荡15秒或者上下颠倒15秒。你试试看。 ...

你回复我干什么。。。。你要回复楼主才对吧。。。
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28楼2012-07-21 12:49:12
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wmjqy

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你吹打了多少时间？出现这种情况可能是裂解不完全或者rna讲解。但是你这提的总RNA不可能全部讲解了啊？也许是你加的trizol量不够或吹打时间不够。另外还有加入氯仿后应该剧烈震荡15秒或者上下颠倒15秒。你试试看。如果还是不行的话，估计是你的细胞有问题了，是不是细胞已经死了！？？？
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29楼2012-07-22 22:31:06
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桃子老好吃

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加入氯仿后蛋白质会变性就呈现白色乳状物，如果你的氯仿没问题的话，会不会是蛋白没出来，也就是会不会还没裂解呢？还有加入氯仿后有充分震荡了吗？
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30楼2012-07-23 13:07:26
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jl860822

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不一定，可能蛋白的量本来就少，有这种情况，主要是看你后续的提取结果怎么样
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31楼2012-07-23 20:10:39
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主用的试剂盒还是自己提的？加氯仿后剧烈震荡都会呈现乳白色，lz这种情况有可能是研磨不充分，组织没有充分裂解，也有可能是氯仿的问题，建议换一瓶新的。
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32楼2012-07-24 08:41:42
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简单回复
shihao6113楼
2012-07-20 15:26   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
huijun04325楼
2012-07-20 15:30   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
郑克宁6楼
2012-07-20 15:31   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
zhaowei35637楼
2012-07-20 15:32   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by 希米兔 at 2012-07-20 15:15:59 是不是研磨的问题啊

zhengkning8楼
2012-07-20 15:34   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
liang88879楼
2012-07-20 15:36   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
jiaoww10楼
2012-07-20 15:36   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
lmm300011楼
2012-07-20 15:40   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
精品画廊13楼
2012-07-20 15:45   回复  
yanzongwei15楼
2012-07-20 15:55   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
albon16楼
2012-07-20 15:57   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
zywzhangyw17楼
2012-07-20 16:00   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
fuq173618楼
2012-07-20 16:03   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
yannanren20楼
2012-07-20 16:20   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
yannanren21楼
2012-07-20 16:20   回复  
rz934822楼
2012-07-20 16:23   回复  
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
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