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cycici1028

木虫 (小有名气)

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[交流] 提RNA加氯仿后不呈乳白色求原因

提RNA加入氯仿后以前都是震荡呈乳白色的这次用的氯仿加进去后不显乳白色静置后有分层现象但是是最下面略显澄清中间层有气泡上层为红色澄清我以为是氯仿的问题问别人借了氯仿加进去后还是一样只有一个样品是和以前处理的正常样品一样求高手解答问题可能出在哪里啊

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1楼 2012-07-20 13:59:21

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328533973

金虫 (正式写手)

应助: 60 (初中生)
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★ ★ ★
cycici1028(金币+5): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-07-21 13:57:44

我当时是这样做的：向细胞培养瓶中加入1mLPBS，洗涤单层细胞，加入1 mlTRlzol培养，小心吹打加入1.5 mLEP管中。RT 5 min，加入0.2 mlCHCl3摇晃15 s，静置3 min。12000 g，4 ℃离心15 min。分三层：水相(含rna,可能还有少量DNA），中间白色薄层（应该是蛋白和DNA），下层有机相（氯仿和蛋白等）。
你的是不是裂解时间不够？还是加入氯仿后摇动太久，静置时间不够，导致蛋白分离效果不好，中层有气泡。