| 查看: 5422 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
yanshuai511铜虫 (小有名气)
|
[求助]
GPCR蛋白N端连flag不表达！急！
|
|
| FLAG 连在G 蛋白耦连的受体的N端，做了两个月了还是没有进展。测序是正确的，也没有移码。可western就是检测不到FLAG的表达。受体的ATG带着和不带着我都做了，也不表达。转染的时间24h和48h我也做过了。载体也换过，还是不表达。我看有的文章说GPCR，有的是有糖基化，所以会影响融合蛋白表达的位置。有没有做过给G蛋白耦连受体连flag的大神，帮忙分析一下。 |
回复此楼» 猜你喜欢
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有141人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
12楼2015-07-02 22:28:56
chenliang_0513
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 8830.8
- 散金: 353
- 红花: 3
- 沙发: 3
- 帖子: 3036
- 在线: 347.9小时
- 虫号: 243880
- 注册: 2006-04-15
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-07-15 19:46:01
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-07-15 19:46:01
|
既然测序是正确的，那就应该ORF没用问题。WB做不出来的原因很多的。先手我不知道你在哪儿表达的，难道是酵母？还怕出现糖基化……如果是酵母一般不需要用wb吧，考染就看的见的；大肠杆菌表达系统一般也不需要。估计你用的还是真核表达系统。 那么你先要注意自己的载体是不是可以在真核细胞中表达？（含真核的启动子，终止序列等）以前用这个载体做过其他的基因表达没有？就是最好有正对照 其次，你最好顶一个beta-actin或GAPDH的抗体，做内参，煮的细胞就可以，如果能做出来，证明wb的操作没有问题，如果做不出来很可能就是操作的问题 我不知道你的抗体是哪个公司的，推荐用sigma的那个M4的鼠源的单抗，有些公司的不好用，效价很低 如果还有问题，再联系我吧，祝实验顺利！ |
2楼2012-07-15 16:20:07
yanshuai511
铜虫 (小有名气)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 302.6
- 散金: 13
- 红花: 4
- 帖子: 58
- 在线: 13小时
- 虫号: 1165383
- 注册: 2010-12-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2012-07-15 16:30:42
chenliang_0513
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 8830.8
- 散金: 353
- 红花: 3
- 沙发: 3
- 帖子: 3036
- 在线: 347.9小时
- 虫号: 243880
- 注册: 2006-04-15
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
4楼2012-07-15 16:36:28