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xiaoling_

木虫 (正式写手)

[求助] 关于毛细管电泳的一点问题,想求助下,看看大家有没有好的建议

本人是研究毛细管电泳方向的,最近用pH=5.5 10mM的磷酸缓冲液其中含有30mM的CTAB,40%的乙腈,在走样的时候,电渗流非常不稳定,run 和run 之间迁移时间相差挺多的,都是拖后,我试过每次进样前用氢氧化钠冲洗,但是太麻烦了这样每次进样前都要电平衡,而且重现性也不是特别好,,有没有高人,提供点建议,小妹不胜感激。
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漠北狼1

金虫 (小有名气)

我想请教个问题:为什么毛细管电泳检测DNA的片段长度的时候要先变性啊?谢谢!期待您的解答。
4楼2013-11-23 11:58:26
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pcec

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaoling_: 金币+5, 有帮助, 感谢回帖!反正走样的时间长了毛细管内壁就变了,也不知道是CTAB还是样品造成的,但是按理说30mM的CTAB应该挺稳的了啊,说不清啊 2012-07-13 15:47:41
因为添加了CTAB(表面活性剂), 导致CTAB严重吸附在管内,重现性变差了,建议NaoH,水,依次清洗几分钟。
2楼2012-07-12 20:28:21
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fenghaiyan82

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaoling_: 金币+5, 有帮助, 非常感谢,我也是这么想的,经过我的实验也觉得是分析物有吸附,,不太好操作啊 2012-07-13 15:45:23
出峰时间延后,峰形变宽峰高变低,一般来说是吸附的缘故。有可能你的分析物易吸附。若真为吸附的缘故,就要在两次电泳间好好冲洗,用NaOH或用能溶解怀疑吸附物的溶剂去冲。
3楼2012-07-13 08:37:24
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