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真菌DNA提取疑惑
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提取步骤如下： 1、用提取裂解缓冲液（2%TRITON、1%SDS、100mM Tris-HCl (pH8.0), 50mM EDTA (pH8.0), 500mM NaCl）300uL悬浮菌体； 2、向Epperdofr管中加入0.5克的玻璃珠和50uL的10%SDS，在涡旋器上以其最大速率涡旋10--20min； 3、加入2倍体积即600uL的6.5M异硫氢酸胍（含50mM Tris-Cl，pH为5.8），充分混匀后，12000RPM离心3分钟 4、吸取上清加300--400uL的异丙醇，充分混匀后分两次上柱，12000RPM离心30秒； 5、70%酒精洗涤一次，12000RPM离心30秒 6、倒掉酒精后，12000RPM离心2分钟 7、加入50UL 10mM Tris，12000RPM离心45秒 8、点10UL电泳 结果：用1OD 1ML大肠杆菌来做，提的DNA浓度高，有10-20ng/uL 用1OD 1ML烟曲霉来做，却提不出任何DNA，但玻璃珠振荡裂解后，加无水乙醇直接沉淀，点电泳，却能看见亮带。（不知道为何会这样的结果） 为什么会是这样的结果呢，希望有人帮帮我。先谢了 |
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