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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教PCR产物酶切后是否可以直接过柱纯化而不胶回收？
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楼1970-01-01 08:00:00
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943475488

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by cynthia8225 at 2012-07-25 14:44:37
觉得可以是可以，但是最好还是跑胶安全点。。。还有就是要是你真的用试剂盒还不如直接乙醇沉淀好了。。。

你好，我做完酶切PCR产物后，现在回收产物有好几个方法，现在只有乙醇沉淀的方法回收率最高，但我想问醇沉最后不会把酶切点切开的部分沉淀下来吗，如果沉下来，对后面连接是会有影响的吧
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16楼2016-01-15 23:05:02
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feixiang1209

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili: 金币+1, ★有帮助, 我原来是这样的，但是感觉这样太耗时间了… 2012-07-12 11:19:45
最好是跑下电泳，毕竟会切下来一些小片段嘛，胶回收的话是只回收的目的条带，应该效果更好一些。反正我们从来没试过直接纯化。
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2楼2012-07-12 09:17:21
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili: 金币+1, ★有帮助, 那酶切产物呢？ 2012-07-12 11:21:22
天根胶回收试剂盒是可以直接用来作为PCR混合液回收的
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3楼2012-07-12 09:34:43
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili: 金币+3, ★★★很有帮助, 酶切后大概短片段有七八个bp。应该没有问题吧？另外，可以除去质粒酶切后的短片段吗？ 2012-07-12 11:24:27
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-20 13:50:36
要看你PCR产物酶切后剩余片段的大小，如果除了目标片段外，剩下的都小于50bp，可以直接用Omega的cycle-pure试剂盒直接回收。如果剩余的较大，最好是做胶回收，这样可以避免后续出现很多假阳性。
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4楼2012-07-12 10:18:20
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